本文選題：乳酸菌　切入點(diǎn)：α-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶　出處：《現(xiàn)代食品科技》2017年02期

【摘要】：α-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(α-GTF)是一類可以利用麥芽糖,異麥芽糖,O-甲基葡萄糖苷等為底物合成低聚糖的多功能性酶,因其功能多樣性和獨(dú)特性而備受關(guān)注。本文利用本團(tuán)隊(duì)測(cè)序的植物乳桿菌(FMNP01)全基因組信息,采用生物信息學(xué)方法分析獲得α-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因(α-gtf),同時(shí)根據(jù)NCBI中上傳的乳酸菌全基因組信息中的α-GTF的DNA序列設(shè)計(jì)引物,利用PCR技術(shù)分別從植物乳桿菌、干酪乳桿菌和短乳桿菌中克隆得到3個(gè)α-gtf基因,其編碼的氨基酸序列相似性分別為42%、29%和29%;將克隆得到的3個(gè)基因分別與表達(dá)載體pET-32a連接構(gòu)建成表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21表達(dá)宿主菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE分析表明,在75 ku處都有一明顯條帶,與預(yù)期蛋白分子量一致,表明這3個(gè)基因成功獲得了表達(dá)。同時(shí)對(duì)誘導(dǎo)劑濃度、誘導(dǎo)時(shí)間和溫度進(jìn)行優(yōu)化,可望為以后相關(guān)研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:偽 -GTFs are a kind of multifunctional enzymes which can synthesize oligosaccharides from maltose, isomaltose O-methylglucoside and so on. The whole genome information of Lactobacillus plantarum sequenced by our team FMNP01 was used. The 偽 -glucosyltransferase gene (偽 -gtfFN) was obtained by bioinformatics, and primers were designed according to the 偽 -GTF DNA sequence in the whole genome information of lactic acid bacteria uploaded from NCBI. The primers were obtained from Lactobacillus plantarum by PCR technique. Three 偽 -gtf genes were cloned from Lactobacillus casei and Lactobacillus brevis, with the amino acid sequence similarity of 422.2% and 29.9%, respectively. The product was induced to express in Escherichia coli BL21 expression host strain. SDS-PAGE analysis showed that there was an obvious band at 75 ku, which was consistent with the expected protein molecular weight, indicating that the three genes were successfully expressed. The optimization of induction time and temperature is expected to lay a foundation for further research.
【作者單位】： 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院食品生物技術(shù)研究所;廣東省微生態(tài)制劑工程技術(shù)研究中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31272217,31372116) 廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015030313425,2015A030310225,2015A020209121)
【分類號(hào)】：Q55;Q78

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