發(fā)布時(shí)間：2018-03-29 04:03

  本文選題：白念珠菌　切入點(diǎn)：CaPhm7　出處：《江南大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：白念珠菌(Candida albicans)是常見(jiàn)的條件型病原真菌,共生于健康人體中,而在免疫力缺陷的病人中則通過(guò)酵母-菌絲形態(tài)的轉(zhuǎn)換導(dǎo)致相關(guān)疾病�？拐婢幬锏拈L(zhǎng)期使用導(dǎo)致高度耐藥的白念珠菌突變株大量出現(xiàn),因此迫切需要開(kāi)發(fā)新型抗真菌藥物。鈣離子穩(wěn)態(tài)與白念珠菌酵母-菌絲形態(tài)的轉(zhuǎn)換和致病性密切相關(guān),因此鈣離子穩(wěn)態(tài)的研究可以為抗真菌藥物的研發(fā)提供新的理論依據(jù)。擬南芥(Arabidopsis thaliala)AtCsc1是一個(gè)最近鑒定的鈣離子通透性壓力門(mén)控陽(yáng)離子通道蛋白,介導(dǎo)高滲壓力下鈣離子、鈉離子和鉀離子的運(yùn)輸。我們通過(guò)氨基酸序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)白念珠菌中的CaPhm7是AtCsc1的同源蛋白,但是它的功能目前仍不清楚。因此本文主要通過(guò)基因敲除等手段探究了CaPHM7基因的缺失對(duì)白念珠菌應(yīng)答藥物壓力和菌絲發(fā)育的影響,進(jìn)而推測(cè)該蛋白的功能。通過(guò)本文的研究,我們得出以下結(jié)論:1)固體平板表型分析的結(jié)果表明CaPHM7基因的缺失影響帶有CaURA3基因的白念珠菌在固體平板上的生長(zhǎng),說(shuō)明該基因可能與CaURA3基因存在遺傳互作。在添加藥物的YPD平板上,CaPHM7基因的雜合子缺失株對(duì)酮康唑敏感,純合子缺失株的敏感性進(jìn)一步增強(qiáng),表明白念珠菌對(duì)酮康唑的敏感性與CaPHM7基因的劑量有關(guān)。此外,CaPHM7基因的缺失還導(dǎo)致白念珠菌對(duì)表面活性劑SDS敏感,對(duì)免疫抑制劑雷帕霉素耐受。2)菌絲發(fā)育分析的結(jié)果表明CaPHM7基因的缺失導(dǎo)致白念珠菌在液體YPD+10%胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)、Spider和Lee’s培養(yǎng)基中菌絲發(fā)育的缺陷,以及在液體Spider培養(yǎng)基中細(xì)胞聚集和絮凝的缺陷。此外,CaPHM7基因的缺失還導(dǎo)致白念珠菌在固體Spider和YPD+10%FBS平板上菌落生長(zhǎng)的缺陷,以及在固體Spider和Lee’s平板上菌絲發(fā)育的缺陷。3)GFP熒光定位分析的結(jié)果表明CaPhm7存在于白念珠菌酵母態(tài)和菌絲態(tài)細(xì)胞的質(zhì)膜上,而SDS、雷帕霉素和酮康唑的處理不影響該蛋白的亞細(xì)胞定位。4)同源蛋白功能互補(bǔ)分析的結(jié)果表明CaPHM7不能互補(bǔ)同源基因ScPHM7在釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)細(xì)胞應(yīng)對(duì)雷帕霉素、氯化鋅和衣霉素壓力時(shí)的功能。5)CaSpo75是AtCsc1在白念珠菌中的另一個(gè)同源蛋白,本文研究發(fā)現(xiàn)CaSPO75基因可能具有負(fù)向調(diào)控細(xì)胞壁壓力和特比萘芬壓力,正向調(diào)控酮康唑壓力以及參與白念珠菌胞內(nèi)鋅離子和錳離子穩(wěn)態(tài)調(diào)控的功能。
[Abstract]:Candida albicansis, a common opportunistic pathogen, is symbiotic in healthy people. In immunodeficient patients, however, yeast-mycelium morphologies lead to related diseases. The long-term use of antifungal drugs leads to the emergence of highly resistant mutant strains of Candida albicans. Therefore, there is an urgent need to develop new antifungal drugs. Calcium homeostasis is closely related to the morphological transformation and pathogenicity of Candida albicans yeast and hyphae. Therefore, the study of calcium homeostasis may provide a new theoretical basis for the development of antifungal drugs. Arabidopsis thaliala)AtCsc1 is a recently identified calcium ion permeability pressure gated cationic channel protein, which mediates calcium ion under hyperosmotic pressure. We found that CaPhm7 in Candida albicans is the homologous protein of AtCsc1 by amino acid sequence alignment. However, its function is still unclear. Therefore, the effects of CaPHM7 gene deletion on drug stress and hyphal development of Candida albicans were investigated by gene knockout, and the function of the protein was speculated. The results of phenotypic analysis of solid plate show that the deletion of CaPHM7 gene affects the growth of Candida albicans with CaURA3 gene on solid plate. The results suggested that the gene might have genetic interaction with CaURA3 gene. The heterozygote deletion of CaPHM7 gene was sensitive to ketoconazole, while the homozygous deletion strain was more sensitive to ketoconazole than that of homozygous deletion strain. The results showed that the sensitivity of Candida albicans to ketoconazole was related to the dose of CaPHM7 gene, and the absence of CaPHM7 gene also led to the susceptibility of Candida albicans to surfactant SDS. The results of hyphal development analysis of the immunosuppressant rapamycin tolerance. 2) showed that the deletion of CaPHM7 gene resulted in the defect of mycelium development in the liquid YPD 10% fetal bovine serum Fetal Bovine serumn FBSS-Spider and Lee's medium, and the results showed that the absence of the CaPHM7 gene resulted in the hyphae development of Candida albicans in 10% fetal bovine serum. In addition, the deletion of CaPHM7 gene also resulted in the colony growth of Candida albicans on solid Spider and YPD 10S plates. The results of fluorescence localization analysis of mycelium development on solid Spider and Lee's plates showed that CaPhm7 existed on the plasma membrane of Candida albicans and hyphae cells. The results of functional complementation analysis of homologous protein of SDS, rapamycin and ketoconazole showed that CaPHM7 could not complement the homologous gene ScPHM7 in Saccharomyces cerevisiae cells. The function of zinc chloride and chlortetracycline is another homologous protein of AtCsc1 in Candida albicans. It has been found that CaSPO75 gene may negatively regulate cell wall pressure and terbinafine pressure. Positive regulation of ketoconazole pressure and its role in the homeostasis of zinc and manganese ions in Candida albicans.
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R379.4

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王冬云,馬慧群,譚升順,馬韻琴,陳慶秀;白念珠菌的毒力研究—分泌性酸性蛋白酶活力的測(cè)定[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2001年06期

2 劉為國(guó);黃敏;;白念珠菌粘附上皮細(xì)胞的機(jī)制[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));2002年02期

3 龐傳超,黃冰玉,崔紹山,李守柔;兼并復(fù)合聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)白念珠菌和其它念珠菌[J];深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志;2002年05期

4 馮文莉;王艷青;奚志琴;楊靜;張潤(rùn)梅;冀英;吳媛;賈曉強(qiáng);;非白念珠菌和白念珠菌感染危險(xiǎn)因素的對(duì)比研究[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2011年17期

5 譚宏月;陳麗華;皇幼明;鐘彬;顧軍;溫海;;白念珠菌基因敲除技術(shù)的研究進(jìn)展[J];中國(guó)真菌學(xué)雜志;2012年06期

6 侯幼紅,王正文,王立新;白念珠菌致病方式的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).皮膚病學(xué)分冊(cè);1990年05期

7 張育華;;白念珠菌與臨床[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1993年01期

8 趙敬軍;;白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶的研究近況[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));2000年02期

9 牛云彤,李少平;白念珠菌毒力因子研究進(jìn)展[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;2000年01期

10 王魯,刁慶春,蔣戈,劉榮卿,鐘白玉;白念珠菌保護(hù)性單抗的研究[J];中華皮膚科雜志;2001年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 王冬云;譚升順;馬慧群;馬韻琴;陳慶秀;;白念珠菌的毒力研究——分泌性酸性蛋白酶活力的測(cè)定[A];2001年中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

2 滿旭;王惠平;;白念珠菌轉(zhuǎn)錄因子編碼基因表達(dá)與氟康唑耐藥的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十八次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2012年

3 黃廣華;;白念珠菌有性生殖、形態(tài)發(fā)生及毒性的進(jìn)化[A];中國(guó)菌物學(xué)會(huì)第五屆會(huì)員代表大會(huì)暨2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2011年

4 王慧;徐寧;喻其林;程欣欣;邢來(lái)君;李明春;;鈣細(xì)胞存活途徑與白念珠菌的致病性[A];中國(guó)菌物學(xué)會(huì)第五屆會(huì)員代表大會(huì)暨2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2011年

5 閻瀾;李妙海;曹永兵;高平揮;王彥;姜遠(yuǎn)英;;白念珠菌耐藥新蛋白——交替氧化酶[A];藥學(xué)發(fā)展前沿論壇及藥理學(xué)博士論壇論文集[C];2008年

6 郭仁勇;;白念珠菌聚苯乙烯黏附增強(qiáng)基因1的研究進(jìn)展[A];2008年浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

7 ;線粒體功能在不同環(huán)境對(duì)白念珠菌生存及代謝的影響[A];2012年中國(guó)菌物學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)會(huì)議摘要[C];2012年

8 曾躍斌;;白念珠菌全基因組表達(dá)譜芯片在抗真菌藥物研究中的應(yīng)用[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)化療藥理學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

9 周萬(wàn)青;沈瀚;張之烽;張葵;;白念珠菌臨床分離調(diào)查及基因分型研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

10 景偉芳;王惠平;;白念珠菌對(duì)唑類藥物耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 國(guó)虹 雨凈;微生物的是是非非[N];中國(guó)教育報(bào);2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 潘搏;白念珠菌甘露多糖疫苗評(píng)價(jià)及白念珠菌侵入人內(nèi)皮和上皮細(xì)胞動(dòng)態(tài)觀察[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 賈淑琳;香蓮方對(duì)耐藥白念珠菌外排泵基因表達(dá)影響的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

3 高盈;口腔和陰道黏膜上皮細(xì)胞與白念珠菌相互作用的免疫學(xué)機(jī)制比較研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

4 徐大勇;白念珠菌質(zhì)膜蛋白CaRch1對(duì)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)和耐藥調(diào)控功能的機(jī)理研究[D];江南大學(xué);2016年

5 胡志德;miR-146a在白念珠菌引發(fā)的固有免疫應(yīng)答中的調(diào)節(jié)作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

6 劉澤虎;白念珠菌形態(tài)、胞壁多糖的結(jié)構(gòu)及其免疫學(xué)活性的相關(guān)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

7 唐寧楓;白念珠菌烯醇化酶的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

8 王平;陰道念珠菌菌種及香蓮方逆轉(zhuǎn)白念珠菌耐藥基因組學(xué)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2013年

9 許懿;小檗堿與氟康唑協(xié)同抗耐藥白念珠菌的作用機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

10 李彩霞;陰道細(xì)菌群落多樣性及外陰陰道念珠菌病相關(guān)白念珠菌基因多態(tài)性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 潘紅波;白念珠菌CaPHM7基因的功能研究[D];江南大學(xué);2017年

2 毛艷紅;HSP90抑制劑對(duì)白念珠菌刺激巨噬細(xì)胞分泌IL-23的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 段志敏;白念珠菌誘導(dǎo)人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1細(xì)胞）固有免疫應(yīng)答機(jī)制的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

4 徐輝;5-氨基酮戊酸光動(dòng)力療法對(duì)白念珠菌抗菌效應(yīng)研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

5 嚴(yán)園園;黃連解毒湯乙酸乙酯提取物對(duì)白念珠菌毒力因子的作用研究[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2015年

6 潘彥衛(wèi);白念珠菌Sap與伊曲康唑耐藥性關(guān)系的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

7 呂亞萍;白念珠菌ERG4基因突變/高表達(dá)與唑類藥物耐藥的關(guān)系[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

8 李晴;VVC患者臨床分離白念珠菌鋅簇轉(zhuǎn)錄因子Cap1、Mrr1對(duì)外排泵基因MDR1的作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

9 牛理達(dá);線粒體呼吸鏈相關(guān)基因在不同碳源條件下對(duì)白念珠菌菌絲形成的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 曹雪姣;法尼醇對(duì)白念珠菌cAMP-PKA信號(hào)通路作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1679453