本文選題：Halomonas　切入點：socia　出處：《應用與環(huán)境生物學報》2017年01期

【摘要】：由ectA、ectB、ectC和ectD編碼的酶可以催化對細胞起保護作用的四氫嘧啶類物質(zhì)的生物合成,嗜鹽菌新種Halomonas socia NY-011~T ectABC和ectD為四氫嘧啶和羥基四氫嘧啶的生產(chǎn)提供新的基因來源.通過SEFA-PCR步移方法從Halomonas socia NY-011~T中克隆ectA、ectB、ectC和ectD基因,并分別構(gòu)建ectABC和ectD的原核表達質(zhì)粒,在E.coli BL21(DE3)中異源表達,利用SDS-PAGE對重組蛋白進行鑒定,通過ACQUITY UPLC MS/MS檢測四氫嘧啶和羥基四氫嘧啶的生成.結(jié)果顯示:H.socia NY-011~T的四氫嘧啶合成基因ectA、ectB、ectC形成基因簇ectABC(KP717055-57),大小為2 506 bp,四氫嘧啶羥化酶基因ectD大小為942 bp(KP717058),與近源種H.elongata DSM258同源性分別為81%和78%;SDS-PAGE檢測到4種融合蛋白,大小(M_r)分別為21.6×10~3、46.4×10~3、14.4×10~3、55.3×10~3,與預期相符;利用ACQUITY UPLC MS/MS發(fā)現(xiàn)僅表達ectABC的重組菌株[E.coli BL21(DE3)/pltac-ABC]中只存在四氫嘧啶,而在表達ectABC和ectD的重組菌株[E.coli BL21(DE3)/pltac-ABC/pETect D]中檢測到四氫嘧啶和羥基四氫嘧啶.本研究從H.socia NY-011~T中分離得到的四氫嘧啶類物質(zhì)的合成基因,能夠在E.coli BL21(DE3)中異源表達并行使功能,為四氫嘧啶類物質(zhì)異源生產(chǎn)提供了新的基因來源.
[Abstract]:Enzymes encoded by ectAminectBnectC and ectD can catalyze the biosynthesis of tetrahydropyrimidines, which are protective to cells. Halomonas socia NY-011~T ectABC and ectD provide a new gene source for the production of tetrahydropyrimidine and hydroxy tetrahydropyrimidine. By SEFA-PCR step method, ectAminectBnectC and ectD genes were cloned from Halomonas socia NY-011~T, and the prokaryotic expression plasmids of ectABC and ectD were constructed, respectively. The recombinant protein was identified by SDS-PAGE. The formation of tetrahydropyrimidine and hydroxy tetrahydropyrimidine was detected by ACQUITY UPLC MS/MS. The results showed that the gene ectABCf717055-57, size 2 506bpand tetrahydropyrimidine hydroxylase gene ectD was 942 bpKP717058, which was a gene cluster of ectABCf717055-57, which is similar to the near source H.elongata. The homology of DSM258 and SDS-PAGE were 81% and 78%, respectively. ACQUITY UPLC MS/MS showed that only tetrahydropyrimidine was present in E.coli BL21(DE3)/pltac-ABC, which was 21.6 脳 10 ~ (3), 46.4 脳 10 ~ (3), 14.4 脳 10 ~ (3), and 55.3 脳 10 ~ (3), respectively, and that only tetrahydropyrimidine was present in the recombinant strain [E.coli BL21(DE3)/pltac-ABC] expressing only ectABC by using ACQUITY UPLC MS/MS. In the recombinant strain [E.coli BL21(DE3)/pltac-ABC/pETect D] expressing ectABC and ectD, tetrahydropyrimidine and hydroxy tetrahydropyrimidine were detected. The synthesis genes of tetrahydropyrimidines isolated from H.socia NY-011~T can be expressed and function in E.coli BL21DE3. It provides a new gene source for allogenic production of tetrahydropyrimidines.
【作者單位】： 四川大學生命科學學院資源與生態(tài)環(huán)境教育部重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金項目(30970043)資助~~
【分類號】：Q78

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本文編號：1677597