本文選題：癌　切入點(diǎn)：肝細(xì)胞　出處：《腫瘤》2017年05期

【摘要】：目的:研究沉默DNAJ同源B亞家族成員11(DNAJ homolog subfamily B member 11,DNAJB 11)基因表達(dá)對(duì)人肝細(xì)胞癌SMMC7721細(xì)胞增殖、周期與凋亡的影響。方法:構(gòu)建攜帶有針對(duì)DNAJB 11基因的DNAJB11-shRNA重組慢病毒載體pCDH-Puro/DNAJB11-shRNA,并制備重組慢病毒。將具有高效感染力的重組病毒感染SMMC7721細(xì)胞。CCK-8法檢測(cè)被感染后SMMC7721細(xì)胞的增殖情況;分別采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法與蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)被感染后,SMMC7721細(xì)胞中DNAJB11、增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和促凋亡基因caspase-3 mRNA及其蛋白的表達(dá);FCM法檢測(cè)沉默DNAJB 11基因表達(dá)后對(duì)SMMC7721細(xì)胞的周期和凋亡的影響。結(jié)果:成功構(gòu)建插入DNAJB11-shRNA的重組慢病毒載體pCDH-Puro/DNAJB11-shRNA。CCK-8法檢測(cè)結(jié)果顯示,感染攜帶有DNAJB11-shRNA重組慢病毒后,SMMC7721細(xì)胞的增殖被抑制(P0.05);實(shí)時(shí)熒光定量PCR法與蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果證實(shí),DNAJB11-shRNA能有效沉默SMMC7721細(xì)胞中DNAJB11 mRNA及其蛋白的表達(dá)(P值均0.05);DNAJB 11基因沉默后,能明顯上調(diào)caspase-3 mRNA及蛋白的表達(dá)水平,并下調(diào)PCNA mRNA及蛋白的表達(dá)水平(P值均0.05)。FCM檢測(cè)結(jié)果表明,沉默DNAJB 11基因的表達(dá)可將SMMC7721細(xì)胞阻滯于細(xì)胞周期的G1期,并能促進(jìn)其凋亡,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均0.01)。結(jié)論:沉默DNAJB 11基因表達(dá)可抑制SMMC7721細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡,這可能與下調(diào)SMMC7721細(xì)胞中增殖相關(guān)蛋白PCNA的表達(dá),上調(diào)凋亡相關(guān)蛋白caspase-3的表達(dá)有關(guān)。
[Abstract]:Aim: to study the effect of silencing 11(DNAJ homolog subfamily B member 11DNA JB11) gene expression on the proliferation of human hepatocellular carcinoma SMMC7721 cells by silencing 11(DNAJ homolog subfamily B member 11DNA JB11, a member of the homologous B subfamily of DNAJ. Methods: the recombinant lentivirus vector pCDH-PurorDNA JB11-shRNAs carrying DNAJB 11 gene was constructed, and the recombinant lentivirus was prepared. The highly infectious recombinant virus was infected with SMMC7721 cells. CCK-8 method was used to detect the proliferation of infected SMMC7721 cells. The expression of cell JB11, proliferating cell nuclear antigen-PCNA and caspase-3 mRNA and their proteins in infected SMMC7721 cells were detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot respectively. Effect of SMMC7721 cell cycle and apoptosis. Results: the recombinant lentivirus vector inserted into DNAJB11-shRNA was successfully constructed by pCDH-Puro/DNAJB11-shRNA.CCK-8 assay. After infection with DNAJB11-shRNA recombinant lentivirus, the proliferation of SMMC7721 cells was inhibited by P0.05.The results of real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting showed that SMMC7721 JB11-shRNA could effectively silence the expression of DNAJB11 mRNA and its protein in SMMC7721 cells after the silencing of DNAJB11 mRNA and DNAJB11 JB11 gene. The expression level of caspase-3 mRNA and protein was up-regulated, and the expression level of PCNA mRNA and protein was down-regulated by 0.05).FCM. The results showed that silencing the expression of DNAJB 11 gene could block SMMC7721 cells from G1 phase of cell cycle and promote its apoptosis. Conclusion: silencing the expression of DNAJB 11 gene can inhibit the proliferation of SMMC7721 cells and promote its apoptosis, which may be related to down-regulating the expression of proliferation-associated protein PCNA and up-regulating the expression of apoptosis-related protein caspase-3 in SMMC7721 cells.
【作者單位】： 重慶市腫瘤研究所血液腫瘤生物治療科;重慶市腫瘤研究所肝膽外科;
【基金】：重慶市應(yīng)用開(kāi)發(fā)計(jì)劃資助項(xiàng)目(編號(hào):cstc2014yykfA110031) 中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)研究項(xiàng)目(編號(hào):ZGYSXH20120701)~~
【分類號(hào)】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1676657