本文選題：非小細胞肺癌　切入點：單核苷酸基因多態(tài)性　出處：《南昌大學》2016年博士論文

【摘要】：研究背景和目的:肺癌是全世界最常見而且研究報道其死亡率也是最高的惡性腫瘤,在全球許多的國家包括我國肺癌的死亡率已經(jīng)遙遙高于其他的惡性腫瘤,已位居全部惡性腫瘤死因的首位。許多的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)基因的單核苷酸多態(tài)性決定著個體遺傳變異,是目前應用最為重要的的遺傳標記物之一。Micro RNA(mi RNA)是一類內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA,mi RNA通常情況下主要以高度保守的方式參與其下游基因表達的調(diào)控。研究已經(jīng)證實mi RNA的單核苷酸多態(tài)性可能發(fā)生在mi RNA從開始翻譯到成熟的過程中的任一環(huán)節(jié)。單核苷酸基因多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)已經(jīng)成為了檢查遺傳信息改變的重要標志之一,已經(jīng)慢慢成為了人類基因組計劃走向應用的關鍵的步驟,而且越來越多的研究發(fā)現(xiàn)其可以參與影響到疾病易感性、個體藥物反應的敏感性。大量的研究證實micro RNA在許多的惡性腫瘤中存在明顯的異常表達,其中mi RNA在肺癌中明顯異常表達,而且與肺癌的惡性程度、耐藥性均密切相關。有研究發(fā)現(xiàn)mi R-146a在腫瘤中表達明顯低于其對應的癌旁組織。有意思的是,最近大量研究發(fā)現(xiàn)mi R-146a與非小細胞性肺癌(nonsmall-cell lung cancer,NSCLC)的發(fā)生發(fā)展密切相關,但具體作用機制未知。此外,有大量的研究發(fā)現(xiàn)MIF在黑色素瘤、NSCLC、肝癌、前列腺癌、腎癌、結直腸癌等多種癌組織中高表達。MIF參與了肺癌特別是NSCLC的發(fā)生和發(fā)展,Kamimura等通過免疫組化檢查發(fā)現(xiàn)NSCLC患者的肺組織MIF過度表達,且研究證實MIF的表達情況與預后存在相關性。大量的研究報道MIF在許多的良性病變的正常的肺組織、NSCLC組織、淋巴結轉移灶的組織中的表達呈現(xiàn)逐漸增強,且研究也證實高表達MIF的總體生存率低于低表達的。提示NSCLC中mi R-146a及MIF都存在異常表達。本課題在此基礎上,通過RT-PCR法及免疫組化分別檢測mi R-146a,MIF在NSCLC肺組織中的表達,并通過通過熒光素酶報告基因分析驗證MIF是否是mi R-146a的下游靶基因,進一步用轉染mi R-146a模擬物改變細胞內(nèi)的mi R-146a的表達,從而觀察NSCLC細胞的生物學特,并探討其對NSCLC細胞中MIF的表達與細胞增殖情況的影響及具體作用機制。方法:1、對支氣管肺癌患者及良性病變患者手術切除的石蠟標本進行DNA提取并PCR檢測,分析良惡性病變mi R-146a單核苷酸多態(tài)性的差異及其與良惡性病變臨床特征之間的相關性,分析基因多態(tài)性在支氣管肺癌患者人群中的表達情況。2、RT-PCR法檢測mi R-146a在NSCLC組織和癌旁正常肺組織及四株NSCLC細胞株和正常人胚肺細胞中的表達,免疫組化檢測MIF在NSCLC組織和癌旁正常肺組織中的表達。3、通過熒光素酶報告基因等實驗方法探討MIF是否是mi R-146a的特異性的下游靶基因,并將構建的mi R-146a模擬物和mi R-146a陰性對照(NC)組通過基因轉染至NSCLC細胞中,改變mi R-146a的表達情況,從而通過q PCR和Western blotting檢測MIF的m RNA及蛋白的表達情況的變化。此外,我們進一步通過運用了MTT法檢測改變mi R-146a后細胞活力、平板克隆實驗檢等檢測腫瘤細胞增殖能力,同時也運用Annexin V-FITC/PI檢測細胞凋亡,也觀察了天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3)的活性的改變情況,同時通過Western blotting分析改變mi R-146a后肺癌細胞中NF-κB-p65蛋白的表達的變化。結果:1、本研究發(fā)現(xiàn)mi R-146a基因在肺癌患者中檢出率低于對照組,且其單核苷酸基因多態(tài)性與肺癌有相關性。2、NSCLC細胞中的mi R-146a低于正常胚肺組織。通過脂質(zhì)體將mi R-146a模擬物轉染到A549細胞后,與NC組比較,MIF蛋白及m RNA表達量都顯著下降(p0.01),細胞活力下降(p0.01),克隆數(shù)目減少(p0.01),細胞凋亡數(shù)目增加(p0.01)。3、NSCLC肺組織中的mi R-146a表達量低于癌旁正常肺組織。MIF蛋白在NSCLC肺組織中的表達高于癌旁正常肺組織,且熒光素酶報告基因證實MIF是mi R-146a下游靶基因,mi R-146模擬物轉染到A549細胞后,Caspase 3活性升高(p0.01),NF-κB p65磷酸化水平下調(diào)(p0.01)。結論:在肺癌患者中mi R-146a單核苷酸基因多態(tài)性與肺癌有相關性,mi R-146a在NSCLC組織及細胞株中低表達,MIF在NSCLC組織中過表達,mi R-146a表達上調(diào)可通過靶向抑制MIF表達,從而抑制A549腫瘤細胞增殖,誘導腫瘤細胞凋亡,可能是通過NF-κB信號通路實現(xiàn)的。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2

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本文編號：1673563