本文選題：非小細(xì)胞肺癌　切入點(diǎn)：單核苷酸基因多態(tài)性　出處：《南昌大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究背景和目的:肺癌是全世界最常見(jiàn)而且研究報(bào)道其死亡率也是最高的惡性腫瘤,在全球許多的國(guó)家包括我國(guó)肺癌的死亡率已經(jīng)遙遙高于其他的惡性腫瘤,已位居全部惡性腫瘤死因的首位。許多的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)基因的單核苷酸多態(tài)性決定著個(gè)體遺傳變異,是目前應(yīng)用最為重要的的遺傳標(biāo)記物之一。Micro RNA(mi RNA)是一類(lèi)內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA,mi RNA通常情況下主要以高度保守的方式參與其下游基因表達(dá)的調(diào)控。研究已經(jīng)證實(shí)mi RNA的單核苷酸多態(tài)性可能發(fā)生在mi RNA從開(kāi)始翻譯到成熟的過(guò)程中的任一環(huán)節(jié)。單核苷酸基因多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)已經(jīng)成為了檢查遺傳信息改變的重要標(biāo)志之一,已經(jīng)慢慢成為了人類(lèi)基因組計(jì)劃走向應(yīng)用的關(guān)鍵的步驟,而且越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)其可以參與影響到疾病易感性、個(gè)體藥物反應(yīng)的敏感性。大量的研究證實(shí)micro RNA在許多的惡性腫瘤中存在明顯的異常表達(dá),其中mi RNA在肺癌中明顯異常表達(dá),而且與肺癌的惡性程度、耐藥性均密切相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)mi R-146a在腫瘤中表達(dá)明顯低于其對(duì)應(yīng)的癌旁組織。有意思的是,最近大量研究發(fā)現(xiàn)mi R-146a與非小細(xì)胞性肺癌(nonsmall-cell lung cancer,NSCLC)的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),但具體作用機(jī)制未知。此外,有大量的研究發(fā)現(xiàn)MIF在黑色素瘤、NSCLC、肝癌、前列腺癌、腎癌、結(jié)直腸癌等多種癌組織中高表達(dá)。MIF參與了肺癌特別是NSCLC的發(fā)生和發(fā)展,Kamimura等通過(guò)免疫組化檢查發(fā)現(xiàn)NSCLC患者的肺組織MIF過(guò)度表達(dá),且研究證實(shí)MIF的表達(dá)情況與預(yù)后存在相關(guān)性。大量的研究報(bào)道MIF在許多的良性病變的正常的肺組織、NSCLC組織、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的組織中的表達(dá)呈現(xiàn)逐漸增強(qiáng),且研究也證實(shí)高表達(dá)MIF的總體生存率低于低表達(dá)的。提示NSCLC中mi R-146a及MIF都存在異常表達(dá)。本課題在此基礎(chǔ)上,通過(guò)RT-PCR法及免疫組化分別檢測(cè)mi R-146a,MIF在NSCLC肺組織中的表達(dá),并通過(guò)通過(guò)熒光素酶報(bào)告基因分析驗(yàn)證MIF是否是mi R-146a的下游靶基因,進(jìn)一步用轉(zhuǎn)染mi R-146a模擬物改變細(xì)胞內(nèi)的mi R-146a的表達(dá),從而觀(guān)察NSCLC細(xì)胞的生物學(xué)特,并探討其對(duì)NSCLC細(xì)胞中MIF的表達(dá)與細(xì)胞增殖情況的影響及具體作用機(jī)制。方法:1、對(duì)支氣管肺癌患者及良性病變患者手術(shù)切除的石蠟標(biāo)本進(jìn)行DNA提取并PCR檢測(cè),分析良惡性病變mi R-146a單核苷酸多態(tài)性的差異及其與良惡性病變臨床特征之間的相關(guān)性,分析基因多態(tài)性在支氣管肺癌患者人群中的表達(dá)情況。2、RT-PCR法檢測(cè)mi R-146a在NSCLC組織和癌旁正常肺組織及四株NSCLC細(xì)胞株和正常人胚肺細(xì)胞中的表達(dá),免疫組化檢測(cè)MIF在NSCLC組織和癌旁正常肺組織中的表達(dá)。3、通過(guò)熒光素酶報(bào)告基因等實(shí)驗(yàn)方法探討MIF是否是mi R-146a的特異性的下游靶基因,并將構(gòu)建的mi R-146a模擬物和mi R-146a陰性對(duì)照(NC)組通過(guò)基因轉(zhuǎn)染至NSCLC細(xì)胞中,改變mi R-146a的表達(dá)情況,從而通過(guò)q PCR和Western blotting檢測(cè)MIF的m RNA及蛋白的表達(dá)情況的變化。此外,我們進(jìn)一步通過(guò)運(yùn)用了MTT法檢測(cè)改變mi R-146a后細(xì)胞活力、平板克隆實(shí)驗(yàn)檢等檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖能力,同時(shí)也運(yùn)用Annexin V-FITC/PI檢測(cè)細(xì)胞凋亡,也觀(guān)察了天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3)的活性的改變情況,同時(shí)通過(guò)Western blotting分析改變mi R-146a后肺癌細(xì)胞中NF-κB-p65蛋白的表達(dá)的變化。結(jié)果:1、本研究發(fā)現(xiàn)mi R-146a基因在肺癌患者中檢出率低于對(duì)照組,且其單核苷酸基因多態(tài)性與肺癌有相關(guān)性。2、NSCLC細(xì)胞中的mi R-146a低于正常胚肺組織。通過(guò)脂質(zhì)體將mi R-146a模擬物轉(zhuǎn)染到A549細(xì)胞后,與NC組比較,MIF蛋白及m RNA表達(dá)量都顯著下降(p0.01),細(xì)胞活力下降(p0.01),克隆數(shù)目減少(p0.01),細(xì)胞凋亡數(shù)目增加(p0.01)。3、NSCLC肺組織中的mi R-146a表達(dá)量低于癌旁正常肺組織。MIF蛋白在NSCLC肺組織中的表達(dá)高于癌旁正常肺組織,且熒光素酶報(bào)告基因證實(shí)MIF是mi R-146a下游靶基因,mi R-146模擬物轉(zhuǎn)染到A549細(xì)胞后,Caspase 3活性升高(p0.01),NF-κB p65磷酸化水平下調(diào)(p0.01)。結(jié)論:在肺癌患者中mi R-146a單核苷酸基因多態(tài)性與肺癌有相關(guān)性,mi R-146a在NSCLC組織及細(xì)胞株中低表達(dá),MIF在NSCLC組織中過(guò)表達(dá),mi R-146a表達(dá)上調(diào)可通過(guò)靶向抑制MIF表達(dá),從而抑制A549腫瘤細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,可能是通過(guò)NF-κB信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：1673563