本文選題：肝失疏泄　切入點：PMDD肝氣郁證　出處：《山東中醫(yī)藥大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:系統(tǒng)回顧肝主疏泄的理論及實驗文獻,結(jié)合課題組前期工作進展,本文采用強迫游泳應(yīng)激(Forced Swim Stress)誘導經(jīng)前煩躁障礙(Premenstrual Dysphoric Disorder,PMDD)肝氣郁證大鼠模型,通過檢測模型大鼠外周血及腦中樞關(guān)鍵生物指標改變,以期篩選并鎖定與PMDD肝氣郁證發(fā)病密切相關(guān)生物標記物,進而為開發(fā)針對性治療藥物提供有價值線索,為揭示肝疏泄失常的可能中樞機制提供一手實驗證據(jù)支撐。方法:本研究采用動物行為實驗與神經(jīng)生化指標檢測相結(jié)合的方法進行探討�！�1選取間期1期、接受期、間期1期3次強迫游泳應(yīng)激,誘導PMDD肝氣郁證大鼠模型,采用懸浮不動時間、高架十字迷宮、Y迷宮、攝食率測試等進行行為學評價,提供有效的PMDD肝氣郁證大鼠模型載體;○2予以氟西汀和舒郁膠囊干預后,分別在接受期和間期1期各進行一次上述行為學評價,模型大鼠病證行為表征得以改善,再次驗證該模型的可靠性;○3采用ELISA檢測血清及杏仁核、海馬、額葉腦區(qū)5-HT、NE、GABA、E2、P、ALLO等指標在各組間的變化,采用RT-PCR、Western-Blot方法檢測三個腦區(qū)GABA_AR4α的基因和蛋白表達,從ALLO和GABA_AR4α亞基基因及蛋白表達變化探討PMDD肝氣郁證模型大鼠發(fā)病機制。結(jié)果:(1)動物行為檢測結(jié)果顯示:FST實驗表明應(yīng)激組大鼠非接受期懸浮不動時間及懸浮不動次數(shù)較接受期顯著增加(P0.05,P0.05),EPM實驗表明應(yīng)激組大鼠非接受期OT%(進入高架十字迷宮開放臂的時間百分比)較接受期顯著降低,予陽性對照藥氟西汀和中藥舒郁膠囊干預后,上述變化消失(P0.05),提示應(yīng)激組大鼠上述行為參數(shù)有典型的動情周期依賴性改變,這和病證臨床特點近似或一致,再次證實強迫游泳應(yīng)激誘導的PMDD肝氣郁證大鼠模型具有良好的表面效度和預期效度。(2)ELISA生化檢測結(jié)果顯示:大鼠血清、海馬、杏仁核、額葉各組間5-HT、NE、ALLO含量變化趨勢相對大致相同,應(yīng)激+純水組顯著性降低(P0.05,P0.01),給藥組明顯升高(P0.05,P0.01);P在血清及三個腦區(qū)中的含量,應(yīng)激+純水組顯著增多(P0.05),給藥組顯著性減少(P0.05,P0.01);血清中舒郁給藥組除外,其孕酮含量較應(yīng)激+純水組有減少趨勢,但未形成統(tǒng)計學差異;應(yīng)激+純水組E2含量較空白對照組顯著性增加(P0.01),藥物干預后的兩個組存在降低趨勢。海馬、杏仁核、額葉三個腦區(qū)各個組間GABA含量應(yīng)激+純水組均顯著性下降(P0.05),兩個給藥組均顯著性升高(P0.05,P0.01),應(yīng)激+氟西汀給藥組升高較應(yīng)激+舒郁給藥組明顯,由此表明PMDD肝氣郁證發(fā)病與上述指標異常改變密切相關(guān);(3)RT-PCR和Western Blot蛋白檢測結(jié)果顯示:各組大鼠杏仁核、海馬、額葉腦區(qū)GABA_AR4α蛋白和mRNA表達基本類似,應(yīng)激+純水組較空白對照組顯著性升高(P0.01,P0.05),應(yīng)激+氟西汀組和應(yīng)激+舒郁組較應(yīng)激+純水組顯著性降低(P0.01,P0.05),提示GABA_AR4α亞基異常表達可能是PMDD肝氣郁證發(fā)病機制之一。結(jié)論:(1)采取強迫游泳應(yīng)激篩選的PMDD肝氣郁證大鼠模型更符合PMDD診斷首要標準,其懸浮不動時間、OT%具有明顯的動情周期依賴性,并增加了對模型大鼠認知和軀體癥狀的行為學評價,提示具有良好的表面效度、結(jié)構(gòu)效度、預期效度;(2)PMDD肝氣郁證發(fā)病與E2、P、GABA_AR4α蛋白和mRNA表達增高,NE、5-HT、ALLO、GABA含量、降低密切相關(guān),這些指標可能是PMDD發(fā)病的關(guān)鍵生物標記物。(3)肝疏泄失常與上述指標異常存在高度相關(guān)性,其深層機制可能以ALLO和GABA_AR4α亞基基因及蛋白表達變化為關(guān)鍵,ALLO可以直接與腦內(nèi)GABAAR結(jié)合,一是通過開放GABA上的Cl-通道,引發(fā)氯離子內(nèi)流,產(chǎn)生一系列抑制效應(yīng);二是通過阻礙GABA對HPA軸的抑制,影響GABA攝取而調(diào)節(jié)神經(jīng)元的興奮與抑制,從而產(chǎn)生各種肝疏泄失常的病證。
[Abstract]:Objective : To study the mechanism of PMDD liver - qi stagnation syndrome ( PMDD ) in rats . It is suggested that the model of PMDD liver qi stagnation syndrome induced by forced swimming stress has good surface validity and expected validity . ( 2 ) The results of ELISA showed that the levels of 5 - HT , NE and ALLO in the serum , hippocampus , almond and frontal lobe increased significantly ( P0.05 , P0.01 ) . ( 2 ) The pathogenesis of PMDD liver qi stagnation syndrome is closely related to the expression of E2 , P , GABA _ AR4 alpha and mRNA , which may be the key biological marker for the pathogenesis of PMDD .

【學位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R228

【參考文獻】

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本文編號：1673155