本文選題：GNRs　切入點(diǎn)：BPVCAM-1　出處：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的:采用種子生長(zhǎng)法制備穩(wěn)定、均一的金納米棒溶液(GNRs),用PSA和BPVCAM-1對(duì)其進(jìn)行表面修飾,同時(shí)負(fù)載核酸類藥物NF-κB-decoy ODNs,考察BPVCAM-1靶向的金納米棒熱療聯(lián)合基因治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的體內(nèi)外效果。研究方法:(1)采用種子生長(zhǎng)法制備金納米棒,三步離心的方法分離純化。紫外分光光度計(jì)(UV)掃描GNRs的紫外特征吸收峰;電感耦合等離子發(fā)射光譜儀(ICP-AES)測(cè)定GNRs的濃度;激光納米粒度分析儀測(cè)定GNRs的粒徑(Size)和電位(Zeta);透射電子顯微鏡(TEM)觀察GNRs的形貌。(2)金納米棒表面帶有正電荷,在靜電吸附作用下負(fù)載帶有負(fù)電荷的基因藥物NF-κB-decoy ODNs和安全的親水性多糖聚唾液酸(PSA);在金-硫鍵的作用下將具有靶向作用的血管內(nèi)皮粘附因子-1(BPVCAM-1)的親和多肽修飾于金納米棒的表面,構(gòu)建出PSABPVCAM-1修飾的GNRs-ODNs的納米給藥系統(tǒng)。二喹啉甲酸法(BCA)測(cè)定靶頭VCAM-1親和多肽的載體結(jié)合率;紅外光譜儀(FTIR)對(duì)納米載體進(jìn)行定性表征;用瓊脂糖凝膠電泳儀對(duì)GNRs、ODN、PSA、BPVCAM-1之間用量的摩爾比例進(jìn)行確定。(3)CCK-8比色法考察各載體材料和給藥系統(tǒng)對(duì)Ges-1細(xì)胞、RAW264.7細(xì)胞和HUVEC細(xì)胞的抑制率;流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞攝取進(jìn)行定量分析;熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡對(duì)細(xì)胞攝取進(jìn)行定性分析;采用ELISA試劑盒檢測(cè)TNF-α、IL-6細(xì)胞炎癥因子含量;采用完全弗氏佐劑(10 mg/ml)尾根部皮下注射小鼠建立AIA炎癥模型;采用活體成像儀考察載體在小鼠的體內(nèi)分布情況;采用病理組織切片考察GNRs-ODN-PSA-BPVCAM-1在體內(nèi)炎癥部位的抗炎作用。研究結(jié)果:本課題制備的GNRs紫外特征吸收峰分別為520nm和806nm,長(zhǎng)徑比大致為4;粒徑Size和電位Zeta分別為39.5±2.03nm和23.0±1.36mV;測(cè)定的GNRs濃度為1.76nM,透射電子顯微鏡呈現(xiàn)GNRs為圓柱形,且形狀大小均一。經(jīng)過(guò)對(duì)GNRs修飾成功制備了GNRs-ODN-PSA-BPVCAM-1納米給藥系統(tǒng),并對(duì)其進(jìn)行一系列表征:粒徑大小為47.5±5.21nm,電位-23.5±1.52mV,物質(zhì)的量關(guān)系為GNRs:ODN:PSA:VCAM-1=0.125 nM:150 nM:5μM:3μM,紫外吸收光譜未發(fā)生明顯變化,透射電子顯微鏡觀察到其表面有一層修飾物,能長(zhǎng)期保存;細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)表明本納米給藥系統(tǒng)無(wú)細(xì)胞毒性,并能夠快速被RAW264.7細(xì)胞和HUVEC細(xì)胞攝取;HUVEC細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)中,GNRs-ODN-PSA-BPVCAM-1+Laser組與各實(shí)驗(yàn)組相比,能更好地抑制細(xì)胞遷移;體內(nèi)外抗炎實(shí)驗(yàn)中,GNRs-ODN-PSA-BPVCAM-1+Laser組與Untreated組及其他實(shí)驗(yàn)組相比,有明顯的抗炎優(yōu)勢(shì);組織切片實(shí)驗(yàn)表明,GNRs-ODN-PSA-BPVCAM-1+Laser組滑膜細(xì)胞增生明顯減弱,纖維排列整齊,關(guān)節(jié)腔內(nèi)幾乎無(wú)炎癥細(xì)胞,軟骨恢復(fù)正常,說(shuō)明BPVCAM-1靶向的金納米棒給藥系統(tǒng),能夠發(fā)揮核酸藥物ODNs、GNRs和熱療的協(xié)同抗炎效果。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建的GNRs-ODN-PSA-BPVCAM-1靶向納米給藥系統(tǒng)是一種安全有效的制劑,能夠發(fā)揮核酸藥物ODNs、GNRs和熱療的協(xié)同抗炎效果,在體內(nèi)外均有良好的抗炎活性,為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療提供了新思路。
[Abstract]:Objective: To study the growth stability were prepared by seed, gold nanorods with uniform solution (GNRs), to modify the surface of PSA and BPVCAM-1, while the load is NF- K B-decoy ODNs nucleic acid drugs, the treatment of rheumatoid arthritis to target BPVCAM-1 gene on gold nanorods hyperthermia combined with in vitro and in vivo effect. Methods: (1) preparation of gold nanorods by seed growth method, separation and purification method of three step centrifugation. Ultraviolet spectrophotometer (UV) UV characteristic absorption peak of GNRs scanning; inductively coupled plasma atomic emission spectrometry (ICP-AES) determination of the concentration of GNRs nanoparticles; laser particle size analyzer for determination of GNRs (Size) and potential (Zeta); transmission electron microscopy (TEM) morphology of GNRs was observed. (2) gold nanorods with a positive charge in electrostatic adsorption under load of negatively charged drug NF- kappa B-decoy ODNs and safety of hydrophilic polysaccharide polysialic acid (PSA); the gold sulfur bond under the effect of targeting vascular endothelial adhesion factor -1 (BPVCAM-1) surface affinity peptide modified on gold nanorods, construct PSABPVCAM-1 nanoparticles modified GNRs-ODNs delivery system. The two BCA (BCA) determination of the target vector VCAM-1 affinity binding peptides rate; infrared spectrometer (FTIR) for qualitative characterization of nano carrier; agarose gel electrophoresis apparatus of GNRs, ODN, PSA, to determine the amount of the molar ratio of BPVCAM-1. (3) CCK-8 colorimetric method was used to observe the carrier materials and drug delivery systems of Ges-1 cells, the inhibition of RAW264.7 cells and HUVEC cells of rate; quantitative analysis of cell uptake by flow cytometry; fluorescence microscope and laser confocal microscope on the cellular uptake of qualitative analysis; using TNF- alpha ELISA test kit, IL-6 cell inflammatory factor; using complete Freund's adjuvant (10 mg/ml) tail The root of subcutaneous injection of mice to establish AIA model by using in vivo imaging of inflammation; the effect of carrier distribution in the body of mice; anti-inflammatory effects by histological study of GNRs-ODN-PSA-BPVCAM-1 sites of inflammation in the body. The results of the study: this topic GNRs UV characteristic absorption peaks of the preparation were 520nm and 806nm, the ratio of length to diameter is approximately 4; the particle size and Size potential of Zeta were 39.5 + 2.03nm and 23 + 1.36mV; GNRs concentration is 1.76nM, transmission electron microscopy showed GNRs cylindrical shape and uniform size. After modification of GNRs was successfully prepared GNRs-ODN-PSA-BPVCAM-1 nano drug delivery system, and a series of characterization of the particle size is 47.5 +. The 5.21nm potential of -23.5 + 1.52mV, the amount of substance for GNRs:ODN:PSA:VCAM-1=0.125 nM:150 nM:5 M:3 M, UV absorption spectrum did not change significantly, the transmission electron microscope to the table There is a layer of surface modifier, can be preserved for a long time; cell toxicity test indicated that the nano drug delivery system has no cytotoxicity, and quick uptake by RAW264.7 cells and HUVEC cells; HUVEC cell migration experiment, GNRs-ODN-PSA-BPVCAM-1+Laser group compared with the experimental group, can effectively inhibit cell migration; in vivo anti-inflammatory experiments, compared to GNRs-ODN-PSA-BPVCAM-1+Laser group and Untreated group and the other experimental group, has obvious anti-inflammatory advantage; that tissue slice experiment, group GNRs-ODN-PSA-BPVCAM-1+Laser significantly decreased the proliferation of synovial cells, fibers arranged neatly, intra-articular almost no inflammatory cells, restore normal cartilage, indicating that BPVCAM-1 targeting gold nanorods delivery system can play a synergistic anti-inflammatory effect of nucleic acid drugs ODNs, GNRs and hyperthermia. Conclusion: we successfully constructed the GNRs-ODN-PSA-BPVCAM-1 target to nano drug delivery system is a safe and effective The preparation can play the synergistic anti-inflammatory effect of nucleic acid drugs ODNs, GNRs and hyperthermia, and has good anti-inflammatory activity both in vivo and in vitro. It provides a new idea for the treatment of rheumatoid arthritis.

【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R593.22

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本文編號(hào)：1671472