本文選題：牦牛　切入點(diǎn)：乳腺上皮細(xì)胞　出處：《甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：SND1(Staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1)是一種參與基因調(diào)控的轉(zhuǎn)錄共激活因子蛋白。本研究旨在首先得到SND1基因序列,然后分析其生物學(xué)特性,并探討不同濃度IGF-I、EGF、FGF對其在乳腺上皮細(xì)胞表達(dá)的影響。采集泌乳期牦牛乳腺組織,用組織塊貼壁法和胰蛋白酶消化法獲得乳腺上皮細(xì)胞,經(jīng)鑒定后,擴(kuò)增SND1基因,測序并拼接。用相關(guān)生物信息軟件分析牦牛SND1基因特性,用免疫組織化學(xué)和免疫熒光技術(shù)對牦牛SND1基因編碼蛋白進(jìn)行定位分析。向純化的3代乳腺上皮細(xì)胞中分別加入0、50、100、200 ng/m L的IGF-I和EGF,0、25、50、100、200 ng/m L FGF,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR和免疫熒光檢測其對SND1基因和蛋白表達(dá)的影響。研究結(jié)果顯示:(1)體外培養(yǎng)的細(xì)胞表達(dá)角蛋白18、β-酪蛋白,經(jīng)鑒定為乳腺上皮細(xì)胞。(2)牦牛SND1基因全序列為3294 bp,含有2733 bp的ORF(GenBank登錄號:KU884327),共包含20種氨基酸;牦牛SND1基因序列與野牛、家牛、藏羚羊、山羊、豬、野駱駝、馬、黑猩猩、人、褐鼠的同源性分別為99%、98%、96%、94%、91%、90%、90%、89%、89%、85%;系統(tǒng)進(jìn)化樹表明與野牛和家牛的進(jìn)化水平較近,與人和鼠的進(jìn)化水平較遠(yuǎn);SND1基因編碼蛋白為非分泌蛋白,非跨膜蛋白;(3)SND1蛋白在分泌上皮細(xì)胞(乳腺上皮細(xì)胞)和導(dǎo)管上皮細(xì)胞呈陽性高表達(dá),在肌上皮細(xì)胞呈弱表達(dá),在乳腺上皮細(xì)胞胞核高表達(dá),胞質(zhì)弱表達(dá)。(4)IGF-I、EGF、FGF均可提高牦牛乳腺上皮細(xì)胞SND1基因和蛋白的表達(dá)。200 ng/m L IGF-I實(shí)驗(yàn)組,SND1基因和蛋白表達(dá)量最高,顯著高于其他濃度組(P0.05);EGF和FGF濃度均為100 ng/m L時(shí),SND1基因和蛋白表達(dá)量最高,顯著高于其他濃度組(P0.05)。從本研究得到了包含完整ORF的SND1基因序列,該序列高度保守,同時(shí)也存在種屬特異性。IGF-I、EGF和FGF生長因子均可在體外調(diào)控牦牛乳腺上皮細(xì)胞中SND1蛋白的表達(dá),在一定程度上參與SND1生物學(xué)功能調(diào)控,IGF-I組呈濃度依賴性,EGF和FGF組均有最佳濃度。上述研究結(jié)果為進(jìn)一步探究SND1對牦牛泌乳機(jī)能的調(diào)節(jié)提供了相關(guān)依據(jù),也為通過加入外源因子調(diào)控泌乳提供可能。
[Abstract]:SND1 (Staphylococcal nuclease and Tudor domain containing 1) is a gene involved in the regulation of the transcriptional coactivator protein. The purpose of this study is to first get the SND1 gene sequence and analysis of its biological characteristics, and to explore the effects of different concentrations of IGF-I, EGF, FGF on its expression in mammary epithelial cells of lactating yak. Collection of breast tissue. Got mammary epithelial cells by tissue adherent and trypsin digestion method, after identification, SND1 gene amplification, sequencing and splicing. Analysis of yak SND1 gene with characteristics of biological information software, positioning analysis of yak SND1 gene encoding protein by immunohistochemistry and immunofluorescence technique. The purified mammary epithelial cells to the 3 generation the 0,50100200 ng/m L were added to IGF-I and EGF, 0,25,50100200 ng/m L FGF by real-time fluorescence quantitative PCR and immunofluorescence detection of SND1 gene and egg 鐧借〃杈劇殑褰卞搷.鐮旂┒緇撴灉鏄劇ず:(1)浣撳鍩瑰吇鐨勭粏鑳?yōu)琛ㄨ揪瑙掕泲鐧?8,尾-閰泲鐧，

本文編號：1659978