本文選題：受體　切入點(diǎn)：雌激素　出處：《北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2017年02期

【摘要】：目的:探討尿路上皮癌相關(guān)1(urothelial carcinoma-associated 1,UCA1)基因及miR-18a在雌激素受體(estrogen receptor,ER)陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞他莫昔芬耐藥中的作用和調(diào)控機(jī)制。方法:通過(guò)反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定乳腺癌細(xì)胞中UCA1和miR-18a的表達(dá),用雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-18a和UCA1 3'UTR區(qū)域結(jié)合。在他莫昔芬敏感的MCF-7細(xì)胞中過(guò)表達(dá)UCA1或敲減miR-18a,在他莫昔芬耐藥的LCC9和BT474細(xì)胞中敲減UCA1或過(guò)表達(dá)miR-18a,CCK-8方法測(cè)定細(xì)胞活力,軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞克隆形成能力,流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞周期。結(jié)果:他莫昔芬耐藥的LCC2、LCC9和BT474細(xì)胞中,UCA1表達(dá)量顯著高于他莫昔芬敏感的MCF-7細(xì)胞。MCF-7細(xì)胞在0.1μmol/L他莫昔芬處理后,UCA1的表達(dá)水平顯著升高。UCA1過(guò)表達(dá)提高了MCF-7細(xì)胞在他莫昔芬處理后的活力,而UCA1 siRNA則顯著降低了LCC9和BT474細(xì)胞在他莫昔芬處理后的活力。在MCF-7細(xì)胞中,相對(duì)于質(zhì)粒對(duì)照+他莫昔芬組,UCA1+他莫昔芬組的克隆數(shù)目多19.0%,克隆平均大小增加29.0%,G1期細(xì)胞比例減少7.3%,S期細(xì)胞增加6.7%。在BT474細(xì)胞中,相對(duì)于siRNA對(duì)照+他莫昔芬組,si-UCA1+他莫昔芬組的克隆數(shù)目少54.0%,克隆平均大小減少42.0%,G1期細(xì)胞比例增加9.0%,S期細(xì)胞減少6.2%。UCA1有一個(gè)miR-18a結(jié)合位點(diǎn),敲減miR-18a提高了MCF-7細(xì)胞在他莫昔芬處理后的活力,過(guò)表達(dá)miR-18a則顯著降低了BT474細(xì)胞在他莫昔芬處理后的活力。在MCF-7細(xì)胞中,相對(duì)于對(duì)照+他莫昔芬組,miR-18a抑制+他莫昔芬組的克隆數(shù)目多15.0%,克隆平均大小增加33.0%,G1期細(xì)胞比例減少8.8%,S期細(xì)胞增加5.3%。在BT474細(xì)胞中,相對(duì)于對(duì)照+他莫昔芬組,miR-18a過(guò)表達(dá)+他莫昔芬組的克隆數(shù)目少47.0%,克隆平均大小減少25.0%,G1期細(xì)胞比例增加13.3%,S期細(xì)胞減少7.9%。結(jié)論:UCA1可以通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制miR-18a增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞的他莫昔芬治療耐藥。
[Abstract]:Objective: to investigate the role and regulatory mechanism of 1(urothelial carcinoma-associated 1 UCA1) gene and miR-18a in tamoxifen resistance in breast cancer cells with estrogen receptor estrogen receptor ER1 positive. Methods: reverse transcription real-time quantitative PCR was used to detect the fine breast cancer cells. Expression of UCA1 and miR-18a in cells, Double luciferase report assay was used to verify the binding of miR-18a and UCA1 3'UTR region. UCA1 or miR-18a was overexpressed in tamoxifen sensitive MCF-7 cells, and UCA1 or miR-18aCCK-8 was detected in tamoxifen resistant LCC9 and BT474 cells. The ability of cell clone formation was determined by soft Agar clone forming assay. Results: the expression of UCA1 in tamoxifen resistant LCC2 + LCC9 and BT474 cells was significantly higher than that in tamoxifen sensitive MCF-7 cells. MCF-7 cells treated with tamoxifen 0.1 渭 mol/L. Expression increased the activity of MCF-7 cells after tamoxifen treatment. UCA1 siRNA significantly decreased the activity of LCC9 and BT474 cells after tamoxifen treatment. Compared with the plasmid control group of tamoxifen group, the number of clones in tamoxifen group was 19.0. The average size of clone increased 29.0% and the proportion of cells in G1 phase decreased by 7.3%. Compared with the siRNA control group, the number of clones in tamoxifen group was 54.0 less than that in tamoxifen group, and the average clone size was reduced by 42.0 and 42.0g / G _ 1 phase cell proportion increased by 9.0g / L 6.2%.UCA1. There was a miR-18a binding site in 6.2%.UCA1. Knockout miR-18a increased the activity of MCF-7 cells after tamoxifen treatment, and overexpression of miR-18a significantly decreased the activity of BT474 cells after tamoxifen treatment. Compared with the control tamoxifen group, the number of clones in tamoxifen group inhibited by miR-18a was 15.0%, and the average clone size increased by 33.0g / g phase cells. The percentage of cells in G1 phase decreased by 8.8g / L and increased by 5.3% in BT474 cells. Compared with the control tamoxifen group, the number of clones in the tamoxifen group was 47.0 less, the average clone size was reduced by 25.0 and the proportion of cells in G1 phase was increased by 13.3and the cells in S phase were decreased by 7.9.The conclusion is that the weight UCA1 can enhance breast cancer fineness through competitive inhibition of miR-18a. Cytosolic tamoxifen is used to treat drug resistance.
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院乳腺科;
【基金】：北京市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(7142055)資助~~
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：1657700