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利用酵母單雜交篩選擬南芥AtSTK基因表達(dá)調(diào)控蛋白的研究

發(fā)布時間:2018-03-21 17:29

  本文選題:AtSTK 切入點(diǎn):啟動子 出處:《華北農(nóng)學(xué)報》2017年04期  論文類型:期刊論文


【摘要】:擬南芥絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶基因AtSTK的過量表達(dá)可以明顯提高擬南芥的耐鹽性。為進(jìn)一步研究AtSTK基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制,以擬南芥基因組DNA為模板設(shè)計引物,擴(kuò)增獲得AtSTK基因的啟動子序列,并構(gòu)建到報告載體pAbAi,將重組報告載體質(zhì)粒pAbAi-HYT利用BstbⅠ進(jìn)行單酶切線性化,轉(zhuǎn)化酵母菌株Y1H Gold,線性化的pAbAi-HYT整合到基因組中。然后,將純化的擬南芥雙鏈cDNA、pGADT7-Rec載體共轉(zhuǎn)化含有報告載體pAbAi-HYT的酵母菌,將菌液涂布到含有100 ng/m L Ab A的SD/-Leu培養(yǎng)基上進(jìn)行陽性克隆的酵母單雜交篩選。通過回復(fù)鑒定、序列測定,最終篩選獲得了可能參與AtSTK基因表達(dá)調(diào)控的4個擬南芥基因。測序結(jié)果表明,酵母單雜交篩選獲得的擬南芥基因AT3G32090含有WRKY轉(zhuǎn)錄因子保守結(jié)構(gòu)域,為WRKY類轉(zhuǎn)錄因子的一員。因此,AtSTK基因的表達(dá)很可能接受MAPK信號傳導(dǎo)途徑中AT3G32090基因編碼的WRKY類轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控,從而影響擬南芥植株的耐鹽性。
[Abstract]:Overexpression of serine / threonine protein kinase (AtSTK) gene in Arabidopsis thaliana could significantly improve salt tolerance of Arabidopsis thaliana. In order to further study the regulatory mechanism of AtSTK gene expression, primers were designed using Arabidopsis genomic DNA as template. The promoter sequence of AtSTK gene was amplified and constructed into the report vector pAbAi.Recombinant report vector pAbAi-HYT was linearized by Bstb 鈪,

本文編號:1644843

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