發(fā)布時(shí)間：2018-03-21 11:24

  本文選題：熒光假單胞菌　切入點(diǎn)：松材線蟲　出處：《青島大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2017年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：利用基因克隆技術(shù)探究了松材線蟲攜帶的熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)GcM5-1A是否含有溶血素基因以及溶血素活性。根據(jù)熒光假單胞菌疑似溶血素的基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物,通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增得到疑似溶血素基因Hly。將該基因克隆到表達(dá)載體pET-15b上,構(gòu)建了pET-15b-Hly。重組質(zhì)粒pET-15b-Hly轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3)構(gòu)建了工程菌,工程菌經(jīng)過(guò)異丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)后,SDS-PAGE分析表明,疑似溶血素在大腸桿菌中得到了表達(dá)。利用Ni-Sepharose 6(FF)親和樹脂純化了重組蛋白,溶血實(shí)驗(yàn)顯示,純化的重組蛋白可使雞的紅細(xì)胞發(fā)生溶血,證實(shí)本研究所克隆基因確實(shí)編碼溶血素,利用黑松切根苗的生測(cè)表明,重組熒光假單胞菌溶血素對(duì)黑松幼苗有致萎活性,這為深入研究松材線蟲攜帶細(xì)菌在松材線蟲病病理進(jìn)程中的作用打下了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Whether Pseudomonas fluorescens)GcM5-1A carried by Pseudomonas fluorescens)GcM5-1A contained hemolysin gene and hemolysin activity was studied by gene cloning technique. A pair of primers were designed according to the gene sequence of suspected hemolysin of Pseudomonas fluorescens)GcM5-1A. The suspected hemolysin gene Hly. was amplified by PCR technique. The gene was cloned into the expression vector pET-15b and transformed into E. coli BL21 (DE3) by recombinant plasmid pET-15b-Hly. The recombinant strain was induced by isopropyl- 尾 -D-thiogalactoside (IPTG) and analyzed by SDS-PAGE. Suspected hemolysin was expressed in E. coli. Recombinant protein was purified by Ni-Sepharose 6 FFF affinity resin. Hemolysis test showed that the purified recombinant protein could cause hemolysis of chicken erythrocytes, which confirmed that the cloned gene of this study does encode hemolysin. The bioassay of root-cutting seedlings of Pinus tabulaeformis showed that the recombinant Pseudomonas fluorescein hemolysin had wilting activity on Pinus nigra seedlings, which laid a foundation for further study on the role of bacteria carried by pine wood nematode in the pathological process of pine wood nematode disease.
【作者單位】： 青島大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(批準(zhǔn)號(hào):2016GNC110024)資助
【分類號(hào)】：S763

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本文編號(hào)：1643641