本文選題：體細胞核移植　切入點：再克隆　出處：《畜牧獸醫(yī)學(xué)報》2017年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：旨在研究山羊體細胞核移植對克隆后代成纖維細胞IGF2-H19基因座甲基化的影響。以奶山羊耳成纖維細胞(GFC,對照組)和克隆山羊耳成纖維細胞(CFC,試驗組)為試驗材料,培養(yǎng)至第5代時,采用細胞計數(shù)法繪制細胞生長曲線,流式細胞儀檢測細胞凋亡情況,實時熒光定量PCR分析基因的表達差異,亞硫酸氫鹽測序(BSP)分析差異甲基化區(qū)域的甲基化水平。結(jié)果顯示,GFC和CFC組細胞的生長曲線均呈典型"S"型,但CFC組細胞的凋亡率顯著高于GFC組(P0.01);CFC組細胞中Dnmt1(P0.01)、Dnmt3b(P0.01)、Tet1(P0.05)、Tet2(P0.05)、H19(P0.05)和IGF2(P0.01)基因表達水平均顯著低于GFC組,而Tet3、Dnmt3a和IGF2R在2組間無顯著性差異;CFC組細胞中IGF2兩個差異甲基化區(qū)域(DMR1和DMR2)的甲基化水平均顯著低于GFC組(74.1%vs.57.8%,P0.01;76.8%vs.40.0%,P0.01),但IGF2-H19印記基因控制區(qū)域甲基化水平顯著高于GFC組(68.8%vs.84.0%,P0.01)。體細胞核移植通過影響Dnmt和Tet家族基因的表達引起IGF2-H19基因座甲基化的異常,導(dǎo)致基因印記紊亂,進而影響再克隆的效率。
[Abstract]:To study the effect of somatic cell nuclear transfer on the methylation of IGF2-H19 locus in cloned fibroblasts, we used milk goat ear fibroblasts (GFC) and cloned goat ear fibroblasts (experimental group) as experimental materials. At the fifth passage, cell growth curve was plotted by cell count, apoptosis was detected by flow cytometry, and the difference of gene expression was analyzed by real-time fluorescence quantitative PCR. The methylation level of differential methylation regions was analyzed by bisulfite sequencing. The results showed that the growth curves of GFC and CFC cells were typical "S" type. However, the apoptotic rate of CFC group was significantly higher than that of GFC group. The expression levels of Dnmt1P0.01Tnmt3bP0.01Tet1Tet1P0.05Tet2P0.05H19P0.05) and IGF2P0.01) were significantly lower than those of GFC group. There was no significant difference between Tet3a and IGF2R. The methylation level of DMR1 and DMR2 was significantly lower than that of GFC group (74.1vs.57.80.76. 8V s.40.0P0.01a), but the level of methylation in the control region of IGF2-H19 imprinting gene was significantly higher than that in GFC group (68.8vs.84.0V). Nuclear transfer causes abnormal methylation of IGF2-H19 loci by affecting the expression of Dnmt and Tet family genes. Lead to gene imprinting disorder, and then affect the efficiency of re-cloning.
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31301973)
【分類號】：S827

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 賈名威,楊利國,管峰,陸漢希,金穗華;奶牛和肉牛6個STR基因座遺傳多態(tài)性研究[J];遺傳;2004年03期

2 劉亞,章孝榮,張運海,金仁桃,章美玲,汪存利,吳集義;牛、羊成纖維細胞的冷凍與冷藏保存[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2004年02期

3 王爭光;許梓榮;俞頌東;;不同培養(yǎng)體系對胎牛成纖維細胞體外培養(yǎng)的影響[J];中國畜牧雜志;2007年01期

4 霍道坦;陶勇;田寧寧;權(quán)青;白海;胡敏蘭;張運海;章孝榮;;奶牛耳成纖維細胞的分離培養(yǎng)及培養(yǎng)條件的研究[J];中國奶牛;2008年06期

5 安立龍,楊奇,竇忠英,雷安民,楊春榮,高志敏,邱懷;支持牛類胚胎干細胞發(fā)育的飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系的建立[J];西北農(nóng)業(yè)學(xué)報;2001年03期

6 紀元;宋奇;王罡琦;高飛;武蓉;王海軍;唐小春;;轉(zhuǎn)Lp-PLA_2豬成纖維細胞系的建立及其功能鑒定[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2012年08期

7 湯展毅;嚴云勤;高學(xué)軍;冀志庚;朱丹丹;金鑫;;牛myf6基因克隆及在成纖維細胞中的表達[J];東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2010年11期

8 梁洋,劉娣,孫興參,周佳勃,岳順利,于玲珠;豬成纖維細胞凍存方法的研究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2005年04期

9 陳亮;劉丑生;王新莊;趙俊金;李天達;孟飛;;灘羊成纖維細胞系的建立及其生物學(xué)特性研究[J];中國畜牧獸醫(yī);2010年06期

10 李天達;劉丑生;王志剛;張利平;孫秀柱;趙俊金;孟飛;羅桂河;朱金清;;馬頭山羊成纖維細胞系的建立與生物學(xué)特性分析[J];生物工程學(xué)報;2008年12期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 孟繁興;鵝細小病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1與鵝胚成纖維細胞蛋白互作的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 楊奇;Aroclor 1254對3種成纖維細胞的毒性及綿羊ES細胞的分離[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2003年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 齊宏亮;正常奶牛和臨床型乳腺炎患牛乳腺間質(zhì)成纖維細胞生物學(xué)特性對比研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

2 李鑫雨;3T3-L1細胞及小鼠子宮頸成纖維細胞的培養(yǎng)和分化為脂肪細胞的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

3 王蓉蓉;北山羊成纖維細胞體外培養(yǎng)體系的建立及特性分析[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2014年

4 王建;C.elegans Fat-2基因克隆及在牛耳成纖維細胞中的表達[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

5 王文璐;調(diào)控DNMT1對胎牛成纖維細胞細胞增殖、周期、凋亡的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 于思淼;HDACi對牛成纖維細胞體外培養(yǎng)的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

7 李亞男;RepSox誘導(dǎo)牛成纖維細胞向脂肪細胞分化的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

8 廖純穎;奶牛乳腺成纖維細胞中TLR、NOD及其信號通路相關(guān)基因mRNA表達檢測[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

9 王偉;兔HGPRT基因打靶載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因成纖維細胞中GFP基因表達的研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 王一;大腸桿菌對奶牛乳腺成纖維細胞TGF-β1、bFGF和PDGF表達的影響[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

，

本文編號：1641178