本文選題：體細(xì)胞核移植　切入點(diǎn)：再克隆　出處：《畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：旨在研究山羊體細(xì)胞核移植對(duì)克隆后代成纖維細(xì)胞IGF2-H19基因座甲基化的影響。以奶山羊耳成纖維細(xì)胞(GFC,對(duì)照組)和克隆山羊耳成纖維細(xì)胞(CFC,試驗(yàn)組)為試驗(yàn)材料,培養(yǎng)至第5代時(shí),采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況,實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析基因的表達(dá)差異,亞硫酸氫鹽測(cè)序(BSP)分析差異甲基化區(qū)域的甲基化水平。結(jié)果顯示,GFC和CFC組細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線均呈典型"S"型,但CFC組細(xì)胞的凋亡率顯著高于GFC組(P0.01);CFC組細(xì)胞中Dnmt1(P0.01)、Dnmt3b(P0.01)、Tet1(P0.05)、Tet2(P0.05)、H19(P0.05)和IGF2(P0.01)基因表達(dá)水平均顯著低于GFC組,而Tet3、Dnmt3a和IGF2R在2組間無(wú)顯著性差異;CFC組細(xì)胞中IGF2兩個(gè)差異甲基化區(qū)域(DMR1和DMR2)的甲基化水平均顯著低于GFC組(74.1%vs.57.8%,P0.01;76.8%vs.40.0%,P0.01),但I(xiàn)GF2-H19印記基因控制區(qū)域甲基化水平顯著高于GFC組(68.8%vs.84.0%,P0.01)。體細(xì)胞核移植通過(guò)影響Dnmt和Tet家族基因的表達(dá)引起IGF2-H19基因座甲基化的異常,導(dǎo)致基因印記紊亂,進(jìn)而影響再克隆的效率。
[Abstract]:To study the effect of somatic cell nuclear transfer on the methylation of IGF2-H19 locus in cloned fibroblasts, we used milk goat ear fibroblasts (GFC) and cloned goat ear fibroblasts (experimental group) as experimental materials. At the fifth passage, cell growth curve was plotted by cell count, apoptosis was detected by flow cytometry, and the difference of gene expression was analyzed by real-time fluorescence quantitative PCR. The methylation level of differential methylation regions was analyzed by bisulfite sequencing. The results showed that the growth curves of GFC and CFC cells were typical "S" type. However, the apoptotic rate of CFC group was significantly higher than that of GFC group. The expression levels of Dnmt1P0.01Tnmt3bP0.01Tet1Tet1P0.05Tet2P0.05H19P0.05) and IGF2P0.01) were significantly lower than those of GFC group. There was no significant difference between Tet3a and IGF2R. The methylation level of DMR1 and DMR2 was significantly lower than that of GFC group (74.1vs.57.80.76. 8V s.40.0P0.01a), but the level of methylation in the control region of IGF2-H19 imprinting gene was significantly higher than that in GFC group (68.8vs.84.0V). Nuclear transfer causes abnormal methylation of IGF2-H19 loci by affecting the expression of Dnmt and Tet family genes. Lead to gene imprinting disorder, and then affect the efficiency of re-cloning.
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31301973)
【分類號(hào)】：S827

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本文編號(hào)：1641178