發(fā)布時(shí)間：2018-03-20 10:57

  本文選題：多頭帶絳蟲　切入點(diǎn)：dUTPase基因　出處：《畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：探討多頭帶絳蟲脫氧尿苷三磷酸酶(Tm-dUTPase)的基因特征,并初步分析Tm-dUTPase的酶學(xué)活性。通過原核表達(dá),得到重組Tm-dUTPase蛋白,并對(duì)其進(jìn)行Western blot分析、免疫熒光定位及酶學(xué)活性分析。序列分析結(jié)果顯示,Tm-dUTPase基因ORF框?yàn)?47bp,編碼148個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)的蛋白質(zhì)分子大小為16.39ku,等電點(diǎn)為6.263;與豬囊尾蚴和豆?fàn)钅椅豺蔰UTPase基因的氨基酸序列相似性分別為97%和91%。原核表達(dá)的TmdUTPase為可溶性蛋白,純化后的蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度為0.907mg·mL~(-1),Western blot分析顯示,該蛋白質(zhì)能夠被山羊腦多頭蚴陽(yáng)性血清所識(shí)別,具有較強(qiáng)的反應(yīng)原性。免疫熒光定位顯示Tm-dUTPase主要分布于多頭帶絳蟲成蟲的體內(nèi)實(shí)質(zhì)區(qū),同時(shí)廣泛分布于多頭帶絳蟲幼蟲(腦多頭蚴)的頭節(jié)和包囊囊壁外層。酶學(xué)活性試驗(yàn)測(cè)得重組Tm-dUTPase的比活力為986.29U·mg~(-1),EDTA能夠抑制Tm-dUTPase活性,而金屬離子Mg~(2+)、Zn~(2+)、Cu~(2+)能夠增強(qiáng)Tm-dUTPase活性。上述結(jié)果為進(jìn)一步研究Tm-dUTPase基因的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:To study the gene characteristics of deoxyuridine triphosphatase (Tm-dUTPase) of Taenia multiceps, and to analyze the enzymatic activity of Tm-dUTPase. The recombinant Tm-dUTPase protein was obtained by prokaryotic expression and analyzed by Western blot. The result of sequence analysis showed that the ORF frame of Tm-dUTPase gene was 447bp, encoding 148 amino acids. The predicted protein molecular size is 16.39kuU, the isoelectric point is 6.263, and the amino acid sequence similarity with dUTPase gene of cysticercus cellulosae and lentiform cysticercus is 97% and 91.The prokaryotic expression of TmdUTPase is a soluble protein. Western blot analysis of the purified protein with a concentration of 0.907mg 路mL ~ (-1) showed that the protein could be recognized by the positive sera of goat brain polycaria. Immunofluorescence localization showed that Tm-dUTPase was mainly distributed in the parenchymal region of Taenia multiceps. The specific activity of recombinant Tm-dUTPase was 986.29 U 路mg ~ (-1) U 路mg ~ (-1). The metal ion Mg~(2 can enhance the activity of Tm-dUTPase, which lays a foundation for the further study of the biological function of Tm-dUTPase gene.
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院;攀枝花農(nóng)林科學(xué)研究院;
【基金】：四川省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2015NZ1504)
【分類號(hào)】：S852.734

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本文編號(hào)：1638772