本文選題：鵝　切入點：促性腺激素激素釋放激素　出處：《中國獸醫(yī)學(xué)報》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：本研究旨在了解鵝GnRH基因的CDS區(qū)序列及其蛋白表達情況,研究鵝GnRH蛋白的生理功能,為進一步闡明GnRH蛋白影響鵝繁殖性能的調(diào)控機制提供理論基礎(chǔ)。采用RT-PCR方法從溆浦鵝下丘腦擴增獲得GnRH基因的CDS區(qū)序列,將測序正確的DNA序列定向克隆到pET28a(+),構(gòu)建表達載體pET28a-GnRH,并轉(zhuǎn)化至BL21(DE3)大腸桿菌表達目的蛋白,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后進行SDS-PAGE檢測和Western blot分析。結(jié)果顯示:獲得的溆浦鵝GnRH基因CDS區(qū)部分序列,含有270個核苷酸,編碼前體蛋白中的90個氨基酸;溆浦鵝GnRH基因CDS區(qū)在大腸桿菌中得到高效表達,GnRH基因CDS區(qū)的目的蛋白為9 900,最終測得菌體濕重為0.6g/L,純化后得到的蛋白為20~30mg/L;清晰檢測到GnRH基因表達的蛋白特異帶,試驗獲得的抗體對原核表達的GnRH蛋白具有特異性反應(yīng);鵝GnRH基因在動物進化中高度保守,研究得到的鵝GnRH前體蛋白可為進一步研究GnRH基因的生物功能以及其對鵝就巢、產(chǎn)蛋等繁殖性狀的影響奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:The purpose of this study was to investigate the sequence of CDS region of goose GnRH gene and its protein expression, and to study the physiological function of goose GnRH protein. In order to further elucidate the regulatory mechanism of GnRH protein on goose reproductive performance, the CDS region of GnRH gene was amplified from the hypothalamus of Xupu goose by RT-PCR method. The correct DNA sequence was cloned into pET28a (pET28a-GnRH) and transformed into BL21DE-3 E. coli to express the target protein. The results showed that the GnRH gene CDS region of Xupu goose was detected by SDS-PAGE and Western blot analysis after induced by IPTG. Contains 270 nucleotides and encodes 90 amino acids in the precursor protein; Xupu goose GnRH gene CDS region was highly expressed in Escherichia coli, the target protein of CDS region of GnRH gene was 9 900, the final WW of Xupu goose was 0.6 g / L, the purified protein was 20 ~ 30 mg / L, and the protein specific band of GnRH gene expression was clearly detected. The obtained antibody has a specific response to the prokaryotic GnRH protein, and the goose GnRH gene is highly conserved in animal evolution. The obtained goose GnRH precursor protein can be used to further study the biological function of the GnRH gene and its nests to the goose. Laying eggs and other reproductive traits laid a foundation for the impact.
【作者單位】： 西南大學(xué);重慶畜牧科學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(31572386)
【分類號】：S835

【參考文獻】

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本文編號：1636614