本文選題：乳酸菌　切入點(diǎn)：信號(hào)分子AI-　出處：《微生物學(xué)通報(bào)》2017年05期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：【目的】從錫盟地區(qū)酸馬奶酒分離的乳酸菌中篩選出高產(chǎn)信號(hào)分子自體誘導(dǎo)物2(Autoinducer-2,AI-2)的乳酸菌,通過(guò)優(yōu)化其重組蛋白Pfs的誘導(dǎo)條件體外合成信號(hào)分子AI-2�！痉椒ā坷蒙飳W(xué)發(fā)光法對(duì)不同乳酸菌產(chǎn)信號(hào)分子AI-2的產(chǎn)量進(jìn)行比較,以高產(chǎn)信號(hào)分子AI-2乳酸菌基因組DNA為模板,擴(kuò)增其S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(S-adenosylhomocysteine nucleosidase,Pfs)基因,構(gòu)建原核表達(dá)載體。利用異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)進(jìn)行重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá),通過(guò)優(yōu)化培養(yǎng)基、誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)前菌體密度、IPTG濃度以及誘導(dǎo)時(shí)間得到高表達(dá)的Pfs蛋白,使其與底物作用最終體外合成信號(hào)分子AI-2�！窘Y(jié)果】10株乳酸菌均可產(chǎn)信號(hào)分子AI-2,其中屎腸球菌8-3分泌信號(hào)分子AI-2的產(chǎn)量明顯高于其他菌株;重組蛋白的最佳誘導(dǎo)條件為:選取SOC(Super optimal broth with catabolite repression)作為誘導(dǎo)表達(dá)培養(yǎng)基,菌液OD600為0.5 0.7時(shí)加入終濃度為0.1 mmol/L的IPTG,37°C誘導(dǎo)12 h;利用最優(yōu)誘導(dǎo)條件獲得了濃度為4.08 g/L的純化Pfs蛋白,體外合成了信號(hào)分子AI-2。【結(jié)論】酸馬奶酒中分離出的10株乳酸菌均可產(chǎn)生信號(hào)分子AI-2,且屎腸球菌8-3可通過(guò)Pfs基因的作用生成信號(hào)分子AI-2。
[Abstract]:[objective] to screen the high-yield signal molecule autoinducer 2AI-2 from the lactic acid bacteria isolated from the sour horse milk wine in Ximeng area. The signal molecule AI-2was synthesized by optimizing the induction conditions of its recombinant protein Pfs. [methods] the production of signal molecule AI-2 from different lactic acid bacteria was compared by using biological luminescence method. The genomic DNA of high yield signal molecule AI-2 was used as template. The Sadenosylhomocysteine nucleosidase gene was amplified and the prokaryotic expression vector was constructed. The recombinant protein was induced and expressed by isopropyl- 尾 -Dthiopyranoside galactoside (IPTG). The high expression of Pfs protein was obtained by the concentration of IPTG and the induction time before induction. The results showed that 10 strains of lactic acid bacteria could produce signal molecule AI-2, in which Enterococcus faecium 8-3 secreted signal molecule AI-2 was significantly higher than other strains. The optimal induction conditions of recombinant protein were as follows: SOC(Super optimal broth with catabolite expression was used as induction medium, and the final concentration of 0.1 mmol/L was added at 37 擄C for 12 h, and the purified Pfs protein was obtained with the concentration of 4.08 g / L, when OD600 was 0.5-0. 7, and the final concentration was 0.1 mmol/L at 37 擄C for 12 h. The signal molecule AI-2 was synthesized in vitro. [conclusion] all 10 strains of lactic acid bacteria isolated from yoghurt wine can produce signal molecule AI-2, and Enterococcus faecium 8-3 can produce signal molecule AI-2 through the action of Pfs gene.
【作者單位】： 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31360396) 內(nèi)蒙古自治區(qū)研究生科研創(chuàng)新項(xiàng)目(No.B20151012908Z)~~
【分類(lèi)號(hào)】：Q78;Q933

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1632919