本文選題：MRI1基因　切入點：前列腺癌細胞　出處：《鄭州大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：隨著環(huán)境的變化,高脂飲食和人口老齡化等原因,在我國前列腺癌的發(fā)病率由2003年的6.53/10萬,上升至2009年的9.92/10萬,升高了51.91%,呈逐年上升趨勢。目前,前列腺癌根治術(shù)被視為器官局限性前列腺癌局部治療的金標準。此外還有內(nèi)分泌治療、化療以及放療。前列腺癌早期并無明顯的臨床癥狀,前列腺癌的診斷主要依靠前列腺特異性抗原PSA(prostate-specific antigen,PSA)和直腸檢查(digital rectal examination,DRE)的檢查方法。局限性的前列腺癌患者5年生存率幾乎可達100%,但當發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移后其生存率可下降為29%,其一旦發(fā)生不僅影響預后且影響著病人的生活質(zhì)量。腫瘤的轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要生物學特征之一,近年來,惡性腫瘤的復發(fā)轉(zhuǎn)移影響患者的預后與治療,大多數(shù)患者并非是死于原發(fā)腫瘤,而是死于腫瘤轉(zhuǎn)移后所形成的轉(zhuǎn)移癌。隨著人們對與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的不斷深入研究,發(fā)現(xiàn)了Ras(Ras superfamily,Ras)和Myc基因家族(myelocytomatosis viral oncogene,Myc)和突變型P53基因(protein 53,P53)的異常表達可能和腫瘤的轉(zhuǎn)移有相關(guān)性。另外,有研究證明,如果把很多癌基因轉(zhuǎn)染成恰當?shù)氖荏w細胞則可以誘發(fā)轉(zhuǎn)移表型的生成。在對Rho(Ras homolog gene family,Rho)家族逐漸深入的研究中,一種名為“依賴Rho A(Ras homolog gene family,member A,Rho A)的侵襲媒介”(Mediator of Rho A-dependent invasion,MRI1)的未被鑒定基因,又稱其為MRI1基因。從未在人類特征數(shù)據(jù)具有明顯的特點,它經(jīng)常被認為是一個假設(shè)蛋白質(zhì)。它的命名基于其響應于Rho A的感應并具有促進依賴Rho A細胞侵襲和細胞運動的特征,并且為Rho A的FAK(Focal Adhesion Kinase,FAK)的酪氨酸磷酸化的調(diào)節(jié)提供了一種新的方法。其具有雙重功能,一個是其具有催化活性,另一個是其作為一個效應信號參與癌細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移。以往的研究顯示,MRI1基因可能與惡黑、卵巢癌、乳腺癌等腫瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān)。但是其與前列腺癌的關(guān)系如何,國內(nèi)外以往的報道較少。目的:本研究中我們檢測對前列腺癌細胞、沉默MRI1基因后前列腺癌細胞中的MRI1基因及其對應蛋白表達情況。并通過細胞轉(zhuǎn)染,觀察沉默MRI基因后對前列腺癌細胞細胞遷移力的影響,探討MRI1基因在前列腺癌細胞轉(zhuǎn)移中的作用。材料方法:1、研究對象:人前列腺癌細胞系——PC3(protate cancer cell 3,PC3),購自ATCC(American type culture collection),細胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液在37℃、5%CO2及飽濕度條件下培養(yǎng)。2、實驗分組:分為三組,第1組為空白對照組(CTL組)為不做任何處理的前列腺癌細胞,第2組為陰性對照組(NC組)為加入慢病毒空載體轉(zhuǎn)染,第3組為實驗組(sh-1、sh-2、sh-3、sh-4、sh-5組)特異性沉默MRI1基因。3、實驗方法:采用慢病毒載體來特異性靶向沉默MRI1基因的表達,利用實時熒光定量PCR技術(shù)及western blot檢測前列腺癌細胞中MRI1基因及蛋白表達情況。并運用劃痕實驗檢測前列腺癌細胞和沉默MRI1基因后前列腺癌細胞的遷移能力。4、數(shù)據(jù)處理:應用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件,各不同處理后的前列腺癌細胞中的MRI1基因的相對表達值,采用獨立樣本的T檢驗進行分析,比較各組前列腺細胞遷移能力水平,采用方差分析。檢驗水準α=0.05。結(jié)果:1.實時定量PCR結(jié)果顯示,MRI1基因在前列腺癌細胞中表達,實驗組中MRI1基因沉默有效,與CTL組相比MRI1基因的表達出現(xiàn)明顯的下降(P0.05)。2.蛋白印跡結(jié)果表明:內(nèi)參蛋白Vinculin條帶整齊,表明所有樣本蛋白濃度是一致的。與兩對照組蛋白表達相比,實驗組蛋白表達明顯降低。3.劃痕實驗結(jié)果表明:8h后實驗組劃痕寬度最終劃痕寬度明顯大于CTL組,我們將實驗細胞爬行的寬度進定量分析,發(fā)現(xiàn)沉默MRI1基因后的前列腺癌細胞的遷移能力被顯著抑制(P0.05)。結(jié)論:MRI1過表達可能與前列腺癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān),沉默MRI1基因,可有效降低前列腺癌的轉(zhuǎn)移,對尋找轉(zhuǎn)移性前列腺癌的治療有一定的指導作用。
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【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.25

【參考文獻】

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