本文選題：HDND-XIV　切入點(diǎn)：SD大鼠　出處：《中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的研究5-(4-氯苯乙基)亞胺基-7-氧-乙酰-4-氯苯乙胺基橙皮素,即橙皮素衍生物XIV號(hào)(hesperidin derivative-XIV,HDND-XIV)對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠成纖維滑膜細(xì)胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)炎癥的影響及分子機(jī)制。方法弗氏完全佐劑(Freund's complete adjuvant,FCA)誘導(dǎo)Sprague Dawley(SD)大鼠AA模型(FCA,0.01 ml·kg~(-1)),造模后24 d處理并提取原代FLS;MTT法檢測(cè)HDND-XIV的半抑制濃度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50));酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)基中FLS分泌的白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6),腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)和白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑盒將過表達(dá)質(zhì)粒GV230-MeCP2轉(zhuǎn)染入AA FLS;Western blot法檢測(cè)MeCP2、PTCH1、Gli1、Shh蛋白的表達(dá);焦磷酸測(cè)序法定量檢測(cè)各組PTCH1基因的甲基化程度。結(jié)果 MTT法檢測(cè)HDND-XIV在FLS上的IC_(50)值為161μmol·L~(-1);ELISA篩選出HDND-XIV最佳抗炎濃度為10μmol·L~(-1);Western blot結(jié)果顯示經(jīng)HDND-XIV刺激后,AA FLS中PTCH1表達(dá)升高,MeCP2、Gli1和Shh表達(dá)下降;焦磷酸測(cè)序顯示經(jīng)HDND-XIV刺激后,AA FLS中PTCH1基因甲基化程度明顯降低;在AA FLS中過表達(dá)MeCP2后加HDND-14刺激,Western blot結(jié)果顯示成功過表達(dá)MeCP2后,PTCH1蛋白表達(dá)下降,而Gli1和Shh蛋白表達(dá)升高,ELISA結(jié)果顯示IL-6、IL-1β、TNF-α水平也升高。結(jié)論 HDND-XIV對(duì)于FLS有較明顯的抗炎活性,其機(jī)制可能與抑制MeCP2的表達(dá),降低PTCH1基因甲基化程度有關(guān)。
[Abstract]:Objective to study the effects of 5-chlorophenethyl) amino-7-oxy-acetyl-4-chlorobenzeneethylaminyl hesperidin. The effect and molecular mechanism of hesperidin derivative-XIV-HDND-XIV) on the inflammation of rat synovial fibroblast cells with adjuvant adjuvant arthritis AAA and its molecular mechanism. Methods Freunds complete adjuvant FCA (Freunds complete adjuvant FCA) was used to induce Sprague Dawley SD) rat model FCA 0.01 ml 路kg ~ (-1) and 24 days after establishment of the model, the rat model of FCA0.01 ml 路kg ~ (-1) was induced by Freunds complete adjuvant (Freunds complete adjuvant FCA). Detection of half maximal inhibitory concentration of HDND-XIV and enzyme linked immunosorbent assay-ELISA-MEASURMENT of interleukin-6 interleukin-6 (IL-6), tumor necrosis factor- 偽 necrosis factor-TNF- 偽 (TNF- 偽) and interleukin-1 尾 interleukin-1 尾 interleukin-1 尾 IL-1 尾 (interleukin-1 尾 -interleukin-1 尾 -interleukin-1 尾 -IL-1 尾) in cell culture medium for transfection of Lipofectamine2000 by Lipofectamine2000, the levels of interleukin-6 interleukin-6 (IL-6), tumor necrosis factor- 偽 necrosis factor-TNF- 偽 (TNF- 偽) and interleukin-1 尾 -interleukin-1 尾 -interleukin-1 尾 (IL-1 尾) were detected by Elisa. The overexpression plasmid GV230-MeCP2 was transfected into AA FLSG-Western blot assay to detect the expression of Gli1hprotein. Results the value of HDND-XIV on FLS by MTT assay was 161 渭 mol 路L ~ (-1). The best anti-inflammatory concentration of HDND-XIV was 10 渭 mol 路L ~ (-1) PTCH1 blot. The results showed that the expression of PTCH1 in AA FLS increased after HDND-XIV stimulation and the expression of Shh was decreased. The results of pyrosequencing showed that the degree of methylation of PTCH1 gene in AA FLS was significantly decreased after stimulation by HDND-XIV, and the expression of MeCP2 in AA FLS was decreased after MeCP2 was overexpressed by HDND-14 stimulated by HDND-14. The results of Elisa showed that the level of IL-6 and IL-1 尾 -TNF- 偽 was also increased. Conclusion HDND-XIV has obvious anti-inflammatory activity on FLS, and its mechanism may be related to inhibiting the expression of MeCP2 and reducing the degree of PTCH1 gene methylation.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院安徽省重大自身免疫性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室安徽省創(chuàng)新藥物產(chǎn)業(yè)共性技術(shù)研究院;抗炎免疫藥物教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;安徽醫(yī)科大學(xué)肝病研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81273526,81473268) 安徽省教育廳重點(diǎn)基金項(xiàng)目(No KJ2016A364,KJ2016A365) 安徽省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(No21408085MKL31)
【分類號(hào)】：R965

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本文編號(hào)：1612451