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黑曲霉內(nèi)切菊粉酶基因在畢赤酵母中的表達(dá)及應(yīng)用研究

發(fā)布時(shí)間:2018-03-14 11:36

  本文選題:內(nèi)切菊粉酶 切入點(diǎn):畢赤酵母 出處:《食品工業(yè)科技》2016年08期  論文類型:期刊論文


【摘要】:利用PCR方法從黑曲霉(Aspergillus niger)基因組DNA中擴(kuò)增內(nèi)切菊粉酶(endo I)全長(zhǎng)基因(1551 bp),經(jīng)序列分析后將其連接到表達(dá)載體p PIC9K上,得到重組表達(dá)載體p PIC9K-endo I。重組質(zhì)粒經(jīng)Sac I線性化并電轉(zhuǎn)化到畢赤酵母GS115,陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)酶后考察其酶學(xué)性質(zhì)。酶學(xué)性質(zhì)研究表明,重組酶的最適p H和最適溫度分別為5和60℃,重組酶在55℃下保溫9 h后,重組菊粉內(nèi)切酶仍殘余83.2%的活性,表現(xiàn)出極高的熱穩(wěn)定性,Cu~(2+)、Ag~+對(duì)重組酶有明顯的抑制作用。對(duì)內(nèi)切菊粉酶水解菊粉的過(guò)程研究表明,重組內(nèi)切菊粉酶能在8 h內(nèi)將4%(w/v)菊粉水解為3~6個(gè)聚合度的低聚果糖,水解11 h后,低聚果糖得率達(dá)到63.5%,本研究為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)以菊粉為原料生產(chǎn)低聚果糖的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The full-length inulinase I gene was amplified from Aspergillus Niger genomic DNA by PCR method, and was sequenced and ligated to the expression vector p PIC9K. The recombinant expression vector p PIC9K-endo Iwas obtained. The recombinant plasmid was linearized by Sac I and transformed into Pichia pastoris GS115. The optimum pH and temperature of the recombinant enzyme were 5 and 60 鈩,

本文編號(hào):1611079

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