本文選題：甜菜樹(shù)　切入點(diǎn)：貝殼杉烯合酶　出處：《食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)》2017年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：本文作者研究了赤霉素合成途徑中的關(guān)鍵酶-貝殼杉烯合酶,對(duì)其功能的研究可以為以后優(yōu)化品種提供基因?qū)用娴幕A(chǔ)。首先通過(guò)RACE-PCR技術(shù),從甜菜樹(shù)葉片中克隆得到貝殼杉烯合酶基因(Ent-kaurene synthase gene,Yl KS)的全長(zhǎng)c DNA,共2 512 bp(Gen Bank登錄號(hào)為KP872698),其ORF長(zhǎng)度為2 232 bp,共編碼743個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量大小為84 987,蛋白質(zhì)等電點(diǎn)為5.264,表明該蛋白質(zhì)呈酸性。將該基因構(gòu)建到表達(dá)載體pET32a中,得到重組質(zhì)粒pET-32a-Yl KS。通過(guò)將p GG/An2、p IRS和重組質(zhì)粒pET-32a-Yl KS 3個(gè)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)入菌株BL21(DE3)中,得到重組菌株,并進(jìn)行發(fā)酵。通過(guò)SDS-PAGE分析發(fā)現(xiàn),重組蛋白成功得到了表達(dá)。最后通過(guò)對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行萃取,并使用GC-MS進(jìn)行檢測(cè),確定了該基因所編碼的酶確實(shí)是貝殼杉烯合酶。
[Abstract]:In this paper, we studied the key enzyme of gibberellin synthesis pathway-kainiaxene synthase. The study of its function can provide the basis of gene level for the later optimization of varieties. Firstly, we use RACE-PCR technique to optimize the gene level of gibberellin synthase. The full-length cDNA of Ent-kaurene synthase gene Yl KS) was cloned from leaves of sugarbeet. The total number of bp(Gen Bank was KP872698, and the length of ORF was 2 232 BP, encoding 743 amino acids. The predicted molecular weight and isoelectric point of the protein were 84 987 and 5.264 respectively, which indicated that the protein was acidic. The gene was constructed into the expression vector pET32a. The recombinant plasmid pET-32a-Yl KS. the recombinant strain was obtained by co-transferring the three plasmids of p G / An2P IRS and recombinant plasmid pET-32a-Yl KS into strain BL21DDE3. The recombinant strain was found by SDS-PAGE analysis. The recombinant protein was successfully expressed. Finally, the enzyme encoded by the gene was determined by extracting the fermentation product and detecting by GC-MS.
【作者單位】： 林木遺傳育種國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所;四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院;中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院/中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)藥物研究所;中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)(RIF2014-01);中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)(CAFYBB2012042)
【分類號(hào)】：Q943.2;S649

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本文編號(hào)：1606106