發(fā)布時(shí)間：2018-03-12 14:09

  本文選題：MARCH　切入點(diǎn)：RNA干擾　出處：《中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2016年10期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:應(yīng)用慢病毒介導(dǎo)的RNAi技術(shù),在乳腺癌MCF-7細(xì)胞中敲減MARCH6基因的表達(dá),研究其對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響。方法:靶向MARCH6基因的sh RNA慢病毒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后,在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率;收集慢病毒液感染MCF-7細(xì)胞后,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光PCR和Western印跡驗(yàn)證RNAi敲減MARCH6基因后,MARCH6基因m RNA和蛋白的表達(dá)影響;應(yīng)用MTT,Brd U細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖能力的變化;采用增殖指數(shù)染色流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期和增殖的改變。結(jié)果:通過在熒光顯微鏡下觀察,MARCH6 sh RNA慢病毒質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,與同明視野對(duì)比,可見80%左右的細(xì)胞帶綠色熒光;感染MCF-7細(xì)胞,90%的細(xì)胞均帶綠色熒光;實(shí)時(shí)熒光PCR和Western印跡驗(yàn)證了MARCH6 sh RNA慢病毒感染MCF-7細(xì)胞后,MARCH6在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平表達(dá)均顯著下降;MTT實(shí)驗(yàn)、Brd U法結(jié)果顯示MARCH6基因敲減組的MCF-7細(xì)胞增殖顯著下降(P0.01),流式細(xì)胞術(shù)分析顯示MARCH6敲減后MCF-7細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞周期抑制,細(xì)胞分裂處于G1期細(xì)胞數(shù)明顯增多,增殖指數(shù)顯著降低。結(jié)論:敲減乳腺癌MCF-7細(xì)胞的MARCH6基因表達(dá)后,抑制了MCF-7細(xì)胞的增殖,并引起細(xì)胞周期G1期阻滯。提示MARCH6通過影響細(xì)胞周期的進(jìn)展,促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖。
[Abstract]:Aim: to study the effects of lentivirus-mediated RNAi on the proliferation and cell cycle of breast cancer MCF-7 cells by knockout MARCH6 gene expression. Methods: MARCH6 gene sh-#en5# lentivirus was transfected into 293T cells. The transfection efficiency was observed under fluorescence microscope, and the expression of m RNA and protein of MARCH6 gene was detected by real-time fluorescent PCR and Western blotting after lentivirus solution was infected with MARCH6 gene. The changes of cell proliferation ability were detected by MTT- Brd U cell proliferation assay. Proliferation index staining flow cytometry was used to detect the cell cycle and proliferation. Results: the vector of MARCH6sh RNA lentivirus was successfully transfected into 293T cells under fluorescence microscope and compared with the same visual field. About 80% of the cells had green fluorescence, 90% of the cells infected with MCF-7 showed green fluorescence. The expression of MARCH6 in MCF-7 cells infected with MARCH6 sh RNA lentivirus was confirmed by real-time fluorescence PCR and Western blotting. The results of Brd U assay showed that the proliferation of MCF-7 cells in MARCH6 gene knockout group decreased significantly (P 0.01). Cell cycle inhibition was observed in MCF-7 cells after MARCH6 knockout. Conclusion: after knockout of MARCH6 gene expression in breast cancer MCF-7 cells, the proliferation of MCF-7 cells was inhibited. It is suggested that MARCH6 can promote the proliferation of breast cancer cells by affecting the progress of cell cycle.
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院腫瘤科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81572612) 湖南省自然科學(xué)基金(2015JJ2183)~~
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：1601893