發(fā)布時(shí)間：2018-03-07 11:36

  本文選題：小反芻獸疫病毒(PPRV)　切入點(diǎn)：F基因　出處：《農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)》2017年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：小反芻獸疫(peste des petits ruminants,PPR)是由副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒屬(Morbillivirus)的小反芻獸疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)引起綿羊(Ovis aries)和山羊(Capra hircus)等小反芻獸的一種急性和高度傳染性病毒性疾病,由于其高死亡率常造成綿羊和山羊養(yǎng)殖業(yè)的重大經(jīng)濟(jì)損失。為研究小反芻獸疫病毒甘肅(GS)株融合蛋白(fusion protein)基因序列特征及其免疫原性,參照Gen Bank中PPRV Nigeria 75/1株F基因序列(Gen Bank登錄號(hào):HQ197753)設(shè)計(jì)引物,應(yīng)用RT-PCR擴(kuò)增PPRV GS株F基因,在測(cè)序及序列分析的基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增去信號(hào)肽和跨膜區(qū)的F基因片段Fa并將其亞克隆至原核表達(dá)載體p ET-32a(+)。重組質(zhì)粒p ET-PPRV-Fa轉(zhuǎn)化大腸桿菌表達(dá)菌(Escherichia coli)Transetta(DE3)后經(jīng)異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物純化后免疫新西蘭兔(Oryctolagus cuniculus)制備多克隆抗體,進(jìn)而應(yīng)用間接酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和Western blot對(duì)重組蛋白免疫原性進(jìn)行分析。結(jié)果表明,PPRV GS株F基因(Gen Bank登錄號(hào):KX822738)完整CDS全長(zhǎng)1 641 bp,編碼546個(gè)氨基酸。去信號(hào)肽和跨膜區(qū)的F基因片段Fa在大腸桿菌中成功獲得表達(dá),重組蛋白大小約為59 k D,且主要以包涵體形式存在;間接ELISA和Western blot結(jié)果表明,純化產(chǎn)物免疫原性良好。研究結(jié)果為F蛋白的相關(guān)功能研究及小反芻獸疫的快速診斷方法的建立提供了理論依據(jù)。
[Abstract]:Peste des petits ruminants (PPRP) is an acute and highly infectious virus of small ruminants, such as Ovis ariesus of sheep and Capra hircus of goats, which is caused by the measles virus of the genus Morbillivirus (Paramyxoviridaeae). In order to study the sequence characteristics and immunogenicity of fusion protein protein fusion gene of small ruminant zoonotic disease virus Gansu GSH strain, the high mortality rate often causes great economic losses in sheep and goat breeding. According to the F gene sequence of PPRV Nigeria 75/1 strain in Gen Bank, the F gene of PPRV GS strain was amplified by RT-PCR, and the F gene of PPRV GS strain was amplified by RT-PCR. On the basis of sequencing and sequence analysis, the F gene of PPRV GS strain was amplified by RT-PCR. Primers were designed to amplify the signal free peptide and the transmembrane F gene fragment Fa and subcloned it into prokaryotic expression vector pET-32a. the recombinant plasmid p ET-PPRV-Fa was transformed into Escherichia coli coli TransettaDE3 and was induced to express by isopropyl 尾 -D-thiogalactopyranoside IPTGG. The purified product was immunized with Oryctolagus cuniculus to prepare polyclonal antibody. Then the immunogenicity of the recombinant protein was analyzed by indirect enzyme-linked immunosorbent assaysa (Elisa) and Western blot. The results showed that the complete CDS was 1 641 BP, encoding 546 amino acids, and the F gene gene-gene-gene-gene-gene-Gen-KX822738 of PPRV GS strain was cloned from Genin Bank accession number: KX822738. The total length of CDS was 1 641 BP, encoding 546 amino acids. And the F gene fragment Fa of the transmembrane region was successfully expressed in Escherichia coli. The result of indirect ELISA and Western blot showed that the recombinant protein was about 59kD and existed mainly in the form of inclusion body. The immunogenicity of the purified product was good. The results provided a theoretical basis for the study of the related function of F protein and the establishment of a rapid diagnostic method for the small ruminant disease.
【作者單位】： 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.31360620) 甘肅省高等學(xué)�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目
【分類號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：1579123