本文選題：內(nèi)皮型一氧化氮合酶　切入點：4b/a　出處：《蘭州大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景:各種慢性腎臟疾病不斷進展的共同病理改變是腎小管間質(zhì)纖維化,它是導致終末期腎衰竭的重要原因,也必然會給社會家庭帶來沉重的“疾病負擔”。這使得“慢性腎臟病-腎間質(zhì)纖維化”成為近年腎臟病領域備受關注的焦點。慢性腎臟病腎間質(zhì)纖維化與某些基因多態(tài)性相關,多個信號轉導通路的活化介導著慢性腎臟病腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生發(fā)展。雷公藤甲素是雷公藤的主要活性成分,雷公藤雖然被廣泛應用于多種腎臟病的治療,但其作用機理有待于進一步探討。目的:探討內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)4b/a基因多態(tài)性與糖尿病腎病腎間質(zhì)纖維化易感性的關系;探討雷公藤甲素對人小管上皮細胞TSP1/TGFβ1,TLR4/NF-κB信號轉導通路的作用。方法:1.用Meta分析的方法,系統(tǒng)檢索PubMed、EMBASE、CBM、CSTJ、CJFD及萬方數(shù)據(jù)庫以收集關于eNOS 4b/a基因多態(tài)性與糖尿病腎病腎間質(zhì)纖維化易感性關系的病例對照研究。用StataSE12進行統(tǒng)計分析及異質(zhì)性檢驗。2.體外培養(yǎng)HK-2細胞,觀察低、中和高濃度的雷公藤甲素對TSP1/TGF-β1,TLR4/NF-κB信號轉導通路的作用。采用Real Time PCR檢測mRNA表達,采用Western blot檢測蛋白表達。培養(yǎng)上清液中總TGF-β1和活性TGF-β1檢測采用ELISA法。結果:1、本Meta分析納入26篇糖尿病腎病對比糖尿病的研究及15篇糖尿病腎病對比健康人群(非糖尿病人群)的研究,病例數(shù)/對照數(shù)分別為6144/4900、2134/2348。納入研究異質(zhì)性中度。Meta分析結果顯示eNOS 4b/a與糖尿病腎病腎間質(zhì)纖維化患病風險有顯著的相關性。敏感性分析(剔除不滿足Hardy-Weinberg平衡定律的研究)檢測結果無顯著變化。與糖尿病患者相比,等位基因模型顯示在總人群(OR=1.26,95%CI:1.10-1.45)、亞洲人種(OR=1.51,95%CI:1.13-2.01)及2型糖尿病患者(OR=1.29,95%CI:1.09-1.54)中有顯著相關性。僅在顯性模型中漏斗圖及Egger檢驗提示存在發(fā)表偏倚(P=0.024)。2、體外研究表明,與各自的陰性對照組比較,陽性組的TSP1/TGF-β1,TLR4/NF-kB的mRNA和蛋白表達均增加。與各自的陽性對照組比較,中/高濃度雷公藤甲素明顯下調(diào)了TSP1/TGF-β1的mRNA和蛋白表達;也明顯下調(diào)了TLR4/NF-kB的mRNA和蛋白表達。中/高濃度雷公藤甲素干預后,總的TGF-β1含量和活性TGF-β1含量均明顯減少。結論:1、Meta分析的研究表明,eNOS 4b/a基因多態(tài)性與糖尿病腎病腎間質(zhì)纖維化易感性相關,尤其是在亞洲人種,但是還需要設計更嚴謹?shù)那罢靶缘难芯恳垣@得更可靠的證據(jù)。2、體外研究表明,雷公藤甲素能夠下調(diào)人腎小管上皮細胞TSP1/TGF-β1的mRNA和蛋白表達,抑制TSP1/TGF-β1通路活化,抑制活性TGF-β1分泌;雷公藤甲素能夠下調(diào)人腎小管上皮細胞TLR4/NF-kB的mRNA和蛋白表達,抑制TLR4/NF-kB通路的活化。
[Abstract]:Background: the common pathological changes of various chronic renal diseases are tubulointerstitial fibrosis, which is an important cause of end-stage renal failure. "chronic kidney disease-renal interstitial fibrosis" has become the focus of attention in the field of kidney disease in recent years. Interstitial fibrosis in chronic kidney disease is associated with some gene polymorphisms. Activation of multiple signal transduction pathways mediates the development of renal interstitial fibrosis in chronic kidney disease. Triptolide is the main active component of Tripterygium wilfordii. Objective: to investigate the relationship between the polymorphism of endothelial nitric oxide synthase (Enos) 4b / a gene and the susceptibility to renal interstitial fibrosis in diabetic nephropathy. To investigate the effect of triptolide on the signal transduction pathway of TSP1/TGF 尾 1 / TLR 4 / NF- 魏 B in human tubular epithelial cells. In order to collect the case-control study on the relationship between the polymorphism of eNOS 4b / a gene and the susceptibility to renal interstitial fibrosis of diabetic nephropathy, we searched the database of PubMedus EMBASEN CSTJ JFD and Wanfang systematically. The statistical analysis of StataSE12 and heterogeneity test. 2. HK-2 cells were cultured in vitro and observed to be low. The effect of triptolide on TSP1 / TGF- 尾 1 TLR4 / NF- 魏 B signal transduction pathway was neutralized. The expression of mRNA was detected by Real Time PCR. Western blot was used to detect protein expression. Total TGF- 尾 1 and activity TGF- 尾 1 in culture supernatant were detected by ELISA method. Results: 1. This Meta analysis included 26 studies of diabetic nephropathy compared with diabetes mellitus and 15 cases of diabetic nephropathy compared with healthy population (non-diabetic nephropathy). The study of diabetes mellitus, The number of cases / controls were 6144 / 4900 / 2134 / 2348 respectively. The results of meta-analysis showed that eNOS 4b / a was significantly correlated with the risk of renal interstitial fibrosis in diabetic nephropathy. There was no significant change in the results of the study. The allelic model showed a significant correlation between OR1. 2695 CI: 1.10-1.45, the Asian species OR1. 51 / 95 CI: 1.13-2.01and type 2 diabetes patients (OR1. 2995 CIW 1.09-1.54). Only in the dominant model and Egger tests indicated the presence of publication bias P0. 024. 2. In vitro studies showed that there was a difference between the two groups. The expression of mRNA and protein in TSP1 / TGF- 尾 1 + TLR4 / NF-kB was increased. Compared with the positive control group, the mRNA and protein expression of TSP1 / TGF- 尾 1 was significantly down-regulated by triptolide. The expression of mRNA and protein in TLR4/NF-kB was also significantly down-regulated. After the intervention of middle / high concentration of triptolide, The total TGF- 尾 1 content and the activity TGF- 尾 1 content were significantly decreased. Conclusion the study of Meta-analysis shows that the polymorphism of Enos 4b / a gene is associated with the susceptibility to renal interstitial fibrosis of diabetic nephropathy, especially in Asian population. In vitro, triptolide can down-regulate the expression of mRNA and protein in TSP1 / TGF- 尾 1, inhibit the activation of TSP1 / TGF- 尾 1 pathway and inhibit the secretion of active TGF- 尾 1. Triptolide can down-regulate the expression of mRNA and protein in TLR4/NF-kB of human renal tubular epithelial cells and inhibit the activation of TLR4/NF-kB pathway.
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R692

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