本文選題：糞腸球菌　切入點(diǎn)：毒力因子基因　出處：《石河子大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：腸球菌是一種革蘭氏陽性共生菌,包括40多個(gè)種,其中糞腸球菌作為醫(yī)源性感染的重要機(jī)會(huì)致病菌之一,能引起人和動(dòng)物的致命感染,其感染病型包括心內(nèi)膜炎、敗血癥、泌尿道感染、腦膜炎和其他機(jī)會(huì)感染。其機(jī)會(huì)感染的關(guān)鍵因素在于擁有眾多毒力因子和獨(dú)特的耐藥機(jī)制。本研究以實(shí)驗(yàn)室歷年分離鑒定的287株糞腸球菌為研究對(duì)象,采用常規(guī)PCR法對(duì)其可能存在的9種常見毒力基因進(jìn)行檢測(cè),并分析各毒力基因的序列及攜帶情況;選取含有不同毒力基因組合的代表菌株進(jìn)行小白鼠攻毒試驗(yàn),觀察不同來源及攜帶不同毒力基因分離株的致病性;選擇耐藥和非耐藥的糞腸球菌分離株,測(cè)定其體外生長(zhǎng)曲線和LD_(50)、CFU與OD_(600)間關(guān)系,并觀察感染動(dòng)物的組織病理學(xué)變化;選取包含不同毒力及耐藥基因組合的動(dòng)物源糞腸球菌作為研究對(duì)象,采用ERIC-PCR法觀察并分析其分子指紋聚類;選擇包含不同毒力基因的非典型耐藥菌株(不耐紅霉素)作為研究對(duì)象,采用體外誘導(dǎo)耐藥試驗(yàn),觀察不同動(dòng)物源分離株耐藥性變化對(duì)毒力基因的影響。結(jié)果如下:1.不同源分離株中各毒力因子基因的分布及序列分析9種毒力基因ace、asa1、asa373、efaA、cylA、gelE、sprE、esp、hyl的檢出率依次為:6.27%(18/287)、6.97%(20/287)、5.92%(17/287)、4.18%(12/287)、5.92%(17/287)、42.86%(123/287)、20.91%(60/287)、11.85%(34/287)、6.62%(19/287)。對(duì)287株糞腸球菌毒力基因的分布分析,其中有104株不攜帶本試驗(yàn)涉及的9種毒力基因,23株攜帶3種毒力基因,9株攜帶4種毒力基因,1株攜帶5種毒力基因,2株攜帶6種毒力基因;序列分析結(jié)果表明,不同動(dòng)物來源分離株攜帶相同毒力基因序列的同源性皆在94%以上。2.包含不同毒力基因型分離株對(duì)小白鼠的致病性試驗(yàn)選取包含不同毒力基因組合的代表菌株,分別為豬源JZ15(gelE,hyl)、雞源J13(asa373,gelE)、牛源D1(ace,gelE,sprE)、羊源62(ace,asa1,cylA,gelE,sprE)、馬源M14(ace,gelE,sprE,esp)和蜣源S3(gelE,sprE,esp)進(jìn)行家兔溶血試驗(yàn)和小白鼠攻毒試驗(yàn)。家兔溶血試驗(yàn)表明,各組均未出現(xiàn)明顯的β溶血現(xiàn)象。小白鼠攻毒試驗(yàn)結(jié)果表明,16h時(shí)豬源組5只小鼠全部死亡,蜣源組死亡3只,羊源組、牛源組、雞源組各死亡1只,馬源組無小鼠死亡,之后至48h各組均不再出現(xiàn)死亡,其致死性強(qiáng)弱依次為豬源蜣源羊源牛源雞源馬源。死亡小白鼠病理變化主要表現(xiàn)為肝臟脂肪變性,肝細(xì)胞壞死;心肌蠟樣壞死;脾梗死;腎間質(zhì)出血;肺部淋巴細(xì)胞浸潤(rùn);腦水腫,有噬神經(jīng)現(xiàn)象并出現(xiàn)壞死灶。試驗(yàn)結(jié)果同時(shí)表明,不同來源糞腸球菌中均包含gelE基因,但豬源糞腸球菌的致病性最強(qiáng),可能與其攜帶hyl基因有關(guān)。3.不同來源分離株耐藥性與致病性的關(guān)系耐藥株豬源JZ15和蜣源S1,非耐藥株豬源JZ3和蜣源S3的體外生長(zhǎng)曲線、LD_(50)、CFU與OD_(600)間關(guān)系和感染動(dòng)物的組織病理變化結(jié)果表明:4株菌均在3h進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,在7h進(jìn)入平緩期;4株菌的半數(shù)致死量分別為:JZ15的LD_(50)=7.079×109,S1的LD_(50)=4.467×10~(10),JZ3的LD_(50)=1.778×10~(10),S3的LD_(50)=7.079×10~(10);各組CFU與OD_(600)關(guān)系曲線結(jié)果表明其差異不顯著;相同動(dòng)物來源耐藥組毒力強(qiáng)于非耐藥組,相同耐藥組進(jìn)行比較,豬源組強(qiáng)于蜣源組。4.不同動(dòng)物源糞腸球菌耐藥性和毒力的相關(guān)性初探采用ERIC-PCR方法并結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)不同動(dòng)物來源糞腸球菌進(jìn)行分子指紋圖譜分析,結(jié)果顯示:相同動(dòng)物來源可以聚為一類,同一動(dòng)物來源進(jìn)行比較,攜帶相似毒力基因與耐藥基因組合的聚為一類,個(gè)別致病株與正常株聚為一類,且同源性較高,存在機(jī)會(huì)感染的幾率;體外誘導(dǎo)試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),耐藥性的增加會(huì)改變糞腸球菌的毒力基因組合,表明耐藥與毒力間存在一定的相關(guān)性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.61

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1569183