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RNA干擾GCF2基因沉默對(duì)人肝癌BEL-7404細(xì)胞周期的影響

發(fā)布時(shí)間:2018-03-05 01:28

  本文選題:GC結(jié)合因子 切入點(diǎn):肝細(xì)胞癌 出處:《醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)》2017年03期  論文類(lèi)型:期刊論文


【摘要】:目的 GC結(jié)合因子2(GCF2)是一種轉(zhuǎn)錄抑制因子,通過(guò)特異性結(jié)合富含GC序列的基因啟動(dòng)子而抑制該基因轉(zhuǎn)錄。文中通過(guò)靶向沉默GCF2基因表達(dá)觀察GCF2對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7404細(xì)胞周期的影響。方法將細(xì)胞分為空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組及GCF2-siRNA組。空白對(duì)照組不轉(zhuǎn)染任何序列,陰性對(duì)照組轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照序列,GCF2-siRNA組轉(zhuǎn)染靶向GCF2基因的GCF2-siRNA序列以沉默GCF2在肝癌BEL-7404細(xì)胞中的表達(dá)。CCK-8法和流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)沉默GCF2對(duì)細(xì)胞增殖和周期的影響,Western blot檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白cyclin D1及cyclin E、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶Cdk2及Cdk4蛋白表達(dá)。結(jié)果 GCF2下調(diào)后,GCF2-siRNA組細(xì)胞增殖在轉(zhuǎn)染24、48、72和96 h受到不同程度抑制,抑制率分別為27.3%,43.6%,33.5%和29.7%,以轉(zhuǎn)染48 h抑制率最高。與GCF2-siRNA組G1期百分比[(61.50±0.47)%]比較,空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組[(45.50±0.75)%、(47.30±2.44)%]均下降(P0.05);與GCF2-siRNA組S期百分比[(21.30±1.23)%]比較,空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組[(37.00±1.80)%、(34.50±1.86)%]均升高(P0.05)。轉(zhuǎn)染48 h后,GCF2-siRNA組cyclin E和Cdk2蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯低于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組(P0.05)。結(jié)論下調(diào)GCF2表達(dá)引起B(yǎng)EL-7404細(xì)胞周期阻滯,提示GCF2對(duì)肝癌細(xì)胞周期影響可能是其參與肝癌發(fā)生發(fā)展的重要途徑。
[Abstract]:Objective GC binding factor 2 (GCF2) is a transcription suppressor. The transcription of the gene was inhibited by binding to a gene promoter rich in GC sequence. The effect of GCF2 on the cell cycle of human hepatocellular carcinoma cell line BEL-7404 was observed by silencing the expression of GCF2 gene. Methods the cells were divided into blank control group. Negative control group and GCF2-siRNA group. Blank control group does not transfect any sequence, Transfection of GCF2-siRNA sequence targeting GCF2 gene in negative control group by silencing GCF2 expression in BEL-7404 cells. CCK-8 method and flow cytometry were used to detect the effect of silencing GCF2 on cell proliferation and cell cycle. Western blot was used to detect the effect of silencing GCF2 on cell proliferation and cell cycle. Results the expression of cyclin D1 and cyclin E, cyclin dependent kinase Cdk2 and Cdk4 protein in GCF2-siRNA group after GCF2 down-regulation was inhibited in different degree at 72 and 96 h after transfection with GCF2-siRNA. The inhibition rates were 27.33% and 29.7%, respectively. The inhibition rate was the highest in 48 hours after transfection. Compared with the GCF2-siRNA group, the percentage of G1 phase [61.50 鹵0.47%] in the blank control group, the negative control group [45.50 鹵0.75 鹵47.30 鹵2.44%] decreased P0.05%, compared with the S phase percentage of GCF2-siRNA group [21.30 鹵1.23], the blank control group. The relative expression of cyclin E and Cdk2 protein in GCF2-siRNA group was significantly lower than that in negative control group and blank control group 48 h after transfection. Conclusion down-regulation of GCF2 expression leads to BEL-7404 cell cycle arrest. The results suggest that the effect of GCF2 on the cell cycle of HCC may be an important way to participate in the development of HCC.
【作者單位】: 桂林醫(yī)學(xué)院組織胚胎學(xué)教研室;桂林醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院;
【基金】:廣西壯族自治區(qū)高?茖W(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(KY2015LX284) 大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201510601003)
【分類(lèi)號(hào)】:R735.7

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本文編號(hào):1568174


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