本文選題：Brugada綜合征　切入點(diǎn)：SCN5A基因　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：一、研究背景:Brugada綜合征(Brugada syndrome,BrS)是一種罕見(jiàn)的遺傳性心律失常綜合征,具有心電圖表現(xiàn)為右胸導(dǎo)聯(lián)V1-V3持續(xù)性ST段抬高和高心源性猝死(sudden cardiac death,SCD)風(fēng)險(xiǎn)特征。本病因發(fā)生暈厥或心源性猝死概率高,且與青壯年猝死高度相關(guān)而日益引起人們的重視。典型心電圖表現(xiàn)為右胸前導(dǎo)聯(lián)(V1-V3)ST段抬高≥22mm,可繼發(fā)T波倒置,而QT間期正常。發(fā)作時(shí)心電圖表先為極短配對(duì)間期室性期前收縮、多形室速、室顫,而體格檢查和輔助檢查(胸片、心臟彩超、心臟MRI等)均無(wú)心臟器質(zhì)性病變證據(jù)。Brugada綜合征的流行病學(xué)特征目前尚無(wú)明確資料,但亞洲和東南亞國(guó)家明顯高于其他國(guó)家,達(dá)0.5/1000-1/1000。在亞洲的某些地區(qū),Brugada綜合征是導(dǎo)致50歲以下青年男性自然死亡的最常見(jiàn)原因。近年的相關(guān)研究表明,Brugada綜合征的發(fā)病機(jī)制與許多基因突變密切相關(guān),尤其是編碼人類(lèi)心臟鈉通道α亞單位的SCN5A基因的突變,其機(jī)理可能是SCN5A基因的突變導(dǎo)致心臟鈉通道蛋白的功能障礙。二、目的:為進(jìn)一步探討B(tài)rugada綜合征離子、細(xì)胞電生理的發(fā)病機(jī)制,本研究擬通過(guò)對(duì)本課題組前期發(fā)現(xiàn)的Brugada綜合征基因SCN5A新突變G1712C進(jìn)行功能表達(dá)研究。三、方法:分兩部分進(jìn)行,第一部分:對(duì)含有相關(guān)SCN5A基因(G1712C)突變片段采用定點(diǎn)誘變PCR進(jìn)行擴(kuò)增,HindⅢ和XbaⅠ酶進(jìn)行質(zhì)粒酶切鑒定法構(gòu)建質(zhì)粒,DNA序列測(cè)定來(lái)鑒定定點(diǎn)誘變是否成功。第二部分:先應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法得到穩(wěn)定表達(dá)的hβ1細(xì)胞系,然后再將hβ1細(xì)胞分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至野生型、突變型兩種質(zhì)粒。細(xì)胞轉(zhuǎn)染后于37℃恒溫箱中孵育48小時(shí),然后再取生長(zhǎng)良好的細(xì)胞分別進(jìn)行膜片鉗檢測(cè)。構(gòu)建pcDNA3.1-GFP-SCN5A突變體質(zhì)粒,通過(guò)脂質(zhì)體Lipofectamine 3000分別將pcDNA3.1-GFP和pcDNA3.1-GFP-SCN5A突變體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HEK293細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染36小時(shí)后再在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率,然后激光共聚焦顯微鏡(leica TCSSP8)下觀察綠色熒光蛋白在轉(zhuǎn)染細(xì)胞的分布情況。四、結(jié)果:成功構(gòu)建了含有SCN5A基因突變G1712C的pcDNA3.1(mpcDNA3.1)表達(dá)重組體。在激光共聚焦顯微鏡下,觀察到GFP-SCN5A突變體(G1712C)主要在細(xì)胞質(zhì)的外周(細(xì)胞膜)中分布,突變位點(diǎn)成功定位到了細(xì)胞膜上。在野生型pcDNA3.1瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系中,指令電位從-60 mV逐漸上升時(shí),鈉電流也漸變大,在-20 mV時(shí)完全激活;激活電壓在-60 mV到-50 mV之間,反轉(zhuǎn)電位在50 mV左右。在G1712C瞬時(shí)轉(zhuǎn)染突變型的細(xì)胞系中,未記錄到鈉電流。五、結(jié)論:野生型pcDNA3.1表達(dá)的Nav1.5通道蛋白與正常心肌細(xì)胞Nav1.5通道電生理特征一致。SCN5A基因G1712C突變導(dǎo)致Nav1.5通道失去功能,可能是該家系Brugada綜合征的病因。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R541.7

【參考文獻(xiàn)】

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