發(fā)布時間：2018-03-02 15:18

  本文選題：血清p53抗體　切入點：BRAFV600E基因突變　出處：《吉林大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：近年來,甲狀腺癌作為最常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤,在全球范圍內(nèi)呈快速增長的趨勢。而占甲狀腺癌80-90%的甲狀腺乳頭狀癌(PTC)發(fā)病率迅速升高,在其中起到主要作用。探討甲狀腺乳頭狀癌的精準(zhǔn)化診治策略已經(jīng)逐漸成為甲狀腺癌的診療的核心問題。目前,臨床常規(guī)的診斷技術(shù),包括超聲或者超聲影像學(xué)檢查及超聲引導(dǎo)下的細(xì)針穿刺抽吸病理學(xué)檢查(fine needle aspiration biopsy,FNAB),可鑒別甲狀腺結(jié)節(jié)性質(zhì)指導(dǎo)手術(shù)治療方案。但臨床應(yīng)用過程中,仍然存在超聲及穿刺細(xì)胞學(xué)出現(xiàn)可疑結(jié)果而導(dǎo)致無法確診,分子學(xué)檢測手段被認(rèn)為是主要的解決方案,但國內(nèi)針對PTC的相關(guān)血清標(biāo)志物及分子學(xué)檢測手段剛剛起步,未在臨床推廣。因此,探討及規(guī)范甲狀腺癌相關(guān)分子標(biāo)志物,將其應(yīng)用與臨床,進(jìn)行甲狀腺惡性腫瘤的臨床診斷、術(shù)后風(fēng)險評估及預(yù)后評估意義重大。在基因標(biāo)志物中,BRAF V600E基因突變作為甲狀腺乳頭狀癌和一些未分化癌中常見的基因突變類型,約45%的甲狀腺乳頭狀癌中存在該突變基因,通過對細(xì)針穿刺樣本進(jìn)行BRAF基因突變檢測正作為重要術(shù)前分子檢測技術(shù)在臨床中推廣。而另一相關(guān)基因P53基因作為甲狀腺未分化癌及低分化癌中的重要突變基因,同時也分布于甲狀腺乳頭狀癌,且對其產(chǎn)生失分化起重要的作用。兩種基因突變在各甲狀腺癌類型上的分布十分相似,且同為甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展及腫瘤失分化的重要促進(jìn)因子,具有一定聯(lián)系。但在臨床,術(shù)前檢測P53基因突變存在局限性,而另一方面與其密切相關(guān)的血清P53抗體檢測受到越來越多的關(guān)注。血清P53抗體作為一種重要的腫瘤患者血清學(xué)標(biāo)志物,與P53基因突變及蛋白積累有一定相關(guān)性。而在噬菌體檢測技術(shù)的介入,可進(jìn)一步提升血清P53抗體的檢出率�；谑删w技術(shù)的血清P53抗體檢測和無負(fù)壓吸引(fine needle capillary cytology,FNCC)細(xì)針穿刺標(biāo)本檢測BRAFV600E基因突變是否能夠為術(shù)前評估兩種基因突變情況提供支持。兩種檢測是否可以輔助甲狀腺乳頭狀癌術(shù)前診斷、手術(shù)方案指導(dǎo)及預(yù)后判斷是本研究關(guān)注的重點。針對以上問題,本論文以甲狀腺乳頭狀癌患者為研究對象,系統(tǒng)探討了如何提高甲狀腺癌患者血清p53抗體檢測效率,并優(yōu)化BRAFV600E檢測方法以判斷兩種基因檢測的相關(guān)性,以及血清學(xué)p53抗體和BRAFV600E基因突變與在甲狀腺乳頭狀癌術(shù)前診斷、手術(shù)指導(dǎo)及預(yù)后分析中的應(yīng)用等問題。針對如何進(jìn)行P53抗體檢測方法的優(yōu)化以達(dá)到應(yīng)用于甲狀腺良惡性疾病鑒別的問題,本研究首先利用合成P53蛋白、并將P53蛋白N端表位SS多肽及SP多肽展示于噬菌體,分別對53例甲狀腺良性疾病及139例PTC患者進(jìn)行血清p53抗體ELISA檢測研究。經(jīng)過統(tǒng)計結(jié)果顯示,噬菌體phage-SP在三種抗原中,其檢出率最高,良惡性疾病中檢出率有明顯差異。同時,可選擇ROC曲線最佳工作值為切點值用于檢測,同時可將Phage-SP與P53蛋白聯(lián)合檢測,可提高靈敏度和準(zhǔn)確度。同時,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),P53抗體與甲狀腺自身免疫抗體無明顯相關(guān)性,而與甲狀腺腫瘤內(nèi)P53蛋白的積累正相關(guān)性。上述結(jié)果表明,血清p53抗體可輔助應(yīng)用于甲狀腺良惡性疾病的臨床診斷。針對如何優(yōu)化BRAFV600E檢測方法的問題,隨后本實驗通過對甲狀腺癌中BRAFV600E檢測方法中的金標(biāo)準(zhǔn)直接測序法(Sanger法測序),臨床常用試劑盒Realtime PCR熒光探針試劑盒檢測法,及免疫組化法(BRAFV600E單克隆抗體VE1)進(jìn)行對比,選擇有效的檢測手段,并探討B(tài)RAF基因檢測在臨床診療中的應(yīng)用。本研究對44例PTC患者及12例良性患者的石蠟病理組織進(jìn)行以上三種檢測方法。結(jié)果顯示,對比金標(biāo)準(zhǔn)直接測序法,另外兩種方法均可檢出PTC腫瘤組織中的BRAFV600E基因突變,且熒光PCR法的特異性更高,而免疫組化法的定位性更好。上述結(jié)果表明三種方法均可有效檢測BRAFV600E基因突變,但直接測序法檢出率上更占優(yōu)勢。針對血清學(xué)p53抗體和BRAFV600E基因突變在術(shù)前診斷、手術(shù)指導(dǎo)及預(yù)后分析中的應(yīng)用的問題。本研究對227例PTC患者及85例良性患者進(jìn)行兩種檢測手段的對比研究。結(jié)果顯示血清學(xué)P53抗體檢測可作為臨床重要的腫瘤篩查標(biāo)記物,同時FNCC聯(lián)合BRAF基因突變檢測,因其較高的敏感性,陽性預(yù)測值及準(zhǔn)確性可作為PTC術(shù)前診斷的重要手段。而血清P53抗體與BRAF基因突變與PTC不良術(shù)后病理組織特征有密切關(guān)系,且呈一定的互補性,兩種檢測同為陽性需要更積極的治療手段。結(jié)論證實兩種檢測手段可作為PTC術(shù)前診斷及手術(shù)方案指導(dǎo)的重要依據(jù)。
[Abstract]:In recent years, thyroid cancer as the most common endocrine tumors, the trend of rapid growth in the global scope. While accounting for the thyroid papillary carcinoma of thyroid cancer 80-90% (PTC) incidence rate increased rapidly, which plays an important role. To explore the strategy of accurate diagnosis and treatment of papillary thyroid carcinoma has gradually become the core problem of diagnosis and treatment thyroid cancer. At present, the conventional clinical diagnosis technology, including the examination of needle aspiration pathology ultrasound or ultrasound imaging and ultrasound guided (fine needle aspiration biopsy, FNAB), can distinguish thyroid nodules to guide surgical treatment. But the clinical application process, there are still ultrasound and aspiration cytology suspicious result cannot be confirmed, the molecular detection method is considered to be the main solution, but the domestic relevant serum markers for PTC and molecular detection Measuring means has just started, not in clinical application. Therefore, to explore and standardize the markers of thyroid cancer related molecules, its application and clinical, clinical diagnosis of thyroid malignant tumor, postoperative assessment of risk assessment and prognosis of great significance. In genetic markers, BRAF and V600E gene mutation in papillary thyroid carcinoma and some undifferentiated carcinoma type common gene mutations, the mutation of thyroid papillary carcinoma about 45%, through the detection of BRAF gene mutation is important as a generalization of preoperative molecular detection technology in clinical on fine needle aspiration samples. And the other related gene P53 gene as an important gene mutation of undifferentiated thyroid carcinoma and low the differentiation of cancer, but also distributed in papillary thyroid carcinoma, and loss of differentiation plays an important role in it. The two mutations distributed in various types of thyroid cancer is very similar, and An important promoting factor with thyroid cancer development and tumor dedifferentiation, has some relationship. But in clinical, preoperative detection of P53 gene mutation limitations, and serum P53 antibody detection on the other hand, closely related to received more and more attention. The serum P53 antibody as an important marker of serum tumor patients with P53, there is a certain correlation between the gene mutation and protein accumulation. In the phage detection technology involved, can further improve the detection rate of serum P53 antibody. The detection of serum P53 antibody phage display technology and non negative pressure (fine needle capillary based on cytology, FNCC) is able to assess support two gene mutations before operation fine needle biopsy specimens of mutation detection of BRAFV600E gene. Two kinds of detection can be diagnosis of papillary thyroid carcinoma before operation, operation scheme and prognosis of the study guide The focus of attention. To solve the above problems, this paper in papillary thyroid carcinoma patients as the research object, discusses how to improve the efficiency of detection of thyroid cancer patients serum p53 antibody, and optimized the BRAFV600E detection method to determine the correlation between the two kinds of genetic testing, and serum p53 antibody and BRAFV600E gene mutation in thyroid cancer papillary before diagnosis, the application of analysis and prognosis of surgery. In view of how to optimize the methods for detection of P53 antibody to applied in the identification of benign and malignant thyroid diseases, this study firstly in the synthesis of P53 protein, and P53 protein N terminal epitope SS peptide and SP peptide displayed on phage, respectively. Study on the detection of serum p53 antibody ELISA in 53 cases of benign thyroid diseases and 139 cases of PTC patients. The statistical results showed that phage phage-SP in three kinds of antigen, the detection rate of the High detection rate of benign and malignant diseases have obvious difference. At the same time, can choose the best value for the detection of ROC curve for cutoff values, while the combined detection of Phage-SP and P53 protein, can improve the sensitivity and accuracy. At the same time, further study found that P53 antibody and thyroid autoimmune antibodies had no significant correlation with P53 protein accumulation in thyroid tumor positive correlation. The results showed that the serum p53 antibody can be used in clinical diagnosis of benign and malignant thyroid diseases. In order to optimize the detection methods for BRAFV600E problems, then this experiment through the gold standard of BRAFV600E in thyroid carcinoma in the detection method of direct sequencing (Sanger sequencing), clinical the commonly used kit Realtime PCR Fluorescent Probe Kit assay and immunohistochemical method (BRAFV600E monoclonal antibody VE1) were compared to select effective means of detection, and discusses the BRAF based Due to the application of detection in the clinical diagnosis and treatment. In this study, 44 patients with PTC and 12 patients with benign pathological paraffin tissue more than three kinds of detection methods. The results showed that compared with the gold standard of direct sequencing, two other methods can be detected BRAFV600E gene PTC mutation in tumor tissue, and specific fluorescent PCR method the higher, and immunohistochemical method. The results show that better positioning of three methods can effectively detect the BRAFV600E gene mutation, but the detection rate of direct sequencing was more dominant. The serological p53 antibody and BRAFV600E gene mutation in the preoperative diagnosis, analysis and prognosis of surgical guidance in the comparative study of this problem. Study of two kinds of detection methods of 227 PTC patients and 85 cases of benign patients. The results of serological detection of P53 antibody can be used as a clinical marker of cancer screening, and FNCC combined with BRAF gene mutation Change detection, due to its high sensitivity, positive predictive value and accuracy can be used as an important means for preoperative diagnosis of PTC. Serum P53 antibody and BRAF gene mutation is closely related with the pathological features of PTC adverse postoperative, and are complementary to each other, two with positive detection require more aggressive treatment. An important basis for the conclusion that two detection methods can be used as the diagnosis and surgical plan PTC operation guidance.

【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R736.1

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本文編號：1557058