發(fā)布時間：2018-02-28 13:11

  本文關(guān)鍵詞： 解淀粉芽孢桿菌 殼聚糖酶 基因克隆 蛋白表達(dá) 酶活性　出處：《水產(chǎn)學(xué)報》2017年10期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為了研究殼聚糖酶的水解活性,實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了解淀粉芽孢桿菌HZ-1510殼聚糖酶基因編碼序列的克隆,并構(gòu)建了谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)-殼聚糖酶融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒,在大腸桿菌中表達(dá)后提取、純化得到重組蛋白,并通過生物信息學(xué)對該蛋白的信號肽、三維結(jié)構(gòu)等進(jìn)行了分析,最后以膠態(tài)殼聚糖溶液為底物研究了該重組殼聚糖酶的活性。結(jié)果顯示,該殼聚糖酶基因的ORF長為837 bp,編碼279個氨基酸,分子量為31.45 ku。在其氨基末端具有信號肽,切割點(diǎn)位于36和37位氨基酸之間。氨基酸序列同源性分析表明該殼聚糖酶屬于GH46家族糖苷水解酶。酶的水解活性最適溫度約為55°C,最適pH為5.5。而金屬離子Fe3+、Ag+、Cu~(2+)、Ba~(2+)和K+對其水解活性都起抑制作用,但是Mn~(2+)、Ca~(2+)和Mg~(2+)對其活性起增強(qiáng)作用。0.1 mmol/L的Zn~(2+)對殼聚糖酶的活性起增強(qiáng)作用,2.0 mmol/L的Zn~(2+)對殼聚糖酶的活性起抑制作用。本實(shí)驗(yàn)研究了解淀粉芽孢桿菌HZ-1510殼聚糖酶在不同條件下的水解活性,為殼聚糖酶的工業(yè)應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to study the hydrolysis activity of chitosanase, the HZ-1510 chitosanase gene encoding sequence of Bacillus amylum was cloned and the expression plasmid of glutathione transferase GST-chitosan fusion protein was constructed. The recombinant protein was extracted and purified from E. coli, and its signal peptide and three-dimensional structure were analyzed by bioinformatics. Finally, the activity of the recombinant chitosanase was studied using colloidal chitosan solution as the substrate. The results showed that the ORF length of the chitinase gene was 837bp, encoding 279 amino acids, and its molecular weight was 31.45 ku.There was a signal peptide at the amino end of the chitosanase gene. The amino acid sequence homology analysis showed that the chitosanase belongs to the GH46 family glycoside hydrolase. The optimum hydrolysis temperature of the enzyme is about 55 擄C and the optimum pH is 5.5. And K both inhibit its hydrolysis activity, However, Mn~(2 and Mg~(2) enhanced its activity. Zn~(2 (0.1 mmol/L) enhanced the activity of chitinase. Zn~(2 (2.0 mmol/L) inhibited the activity of chitinase. This study was conducted to investigate the effect of HZ-1510 chitosan on the activity of Bacillus amylococcus HZ-1510. The hydrolytic activity of glycolase under different conditions, It lays a theoretical foundation for the industrial application of chitosanase.
【作者單位】： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院;華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院;仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動物科技學(xué)院;
【基金】：湖北省科技支撐計劃(2015BBA228) 武漢市科技局基金(2016020101010089) 廣東省海洋與漁業(yè)局基金(2015-033)~~
【分類號】：Q78;Q936

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 單曉雪;鄭人源;張濤;王玉明;;殼聚糖酶的研究進(jìn)展[J];成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2007年Z1期

2 袁建平;李潔;王利敏;;高產(chǎn)殼聚糖酶菌株選育[J];廊坊師范學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版);2009年01期

3 屠潔;張榮華;;殼聚糖酶的研究進(jìn)展與應(yīng)用現(xiàn)狀[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年03期

4 陽麗;楊萍;王曼瑩;;12殼聚糖酶的研究進(jìn)展[J];化學(xué)工程與裝備;2010年05期

5 朱英波;史鳳玉;蔡愛軍;甘金濤;;產(chǎn)殼聚糖酶培養(yǎng)基統(tǒng)計學(xué)篩選及響應(yīng)面優(yōu)化[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年06期

6 張永勤;張杰;常海燕;張坤;劉征東;羅彩華;牟曉鳳;;高靈敏度測定殼聚糖酶活力的新方法及其比較研究[J];食品科學(xué);2013年09期

7 王艷,周培根,王平平,戚曉玉,林麗旋,羅一嵐;產(chǎn)殼聚糖酶菌株的初步篩選[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2003年05期

8 陳小娥,夏文水,余曉斌;微生物殼聚糖酶研究進(jìn)展[J];海洋科學(xué);2004年03期

9 戴蕓,朱旭芬;微生物殼聚糖酶的研究概況[J];浙江大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版);2004年02期

10 王俊英 ,陳遠(yuǎn)童;一株高產(chǎn)胞外殼聚糖酶的優(yōu)良新菌株[J];微生物學(xué)通報;2004年04期

相關(guān)會議論文 前4條

1 楊俐;張濤;余蓉;;固態(tài)發(fā)酵貴州綠僵菌產(chǎn)殼聚糖酶及親和層析純化殼聚糖酶[A];第三屆全國化學(xué)工程與生物化工年會論文摘要集（上）[C];2006年

2 李紅勝;謝為天;徐春厚;;一株解淀粉芽孢桿菌的鑒定及其蛋白酶酶學(xué)性質(zhì)研究[A];生態(tài)環(huán)境與畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展學(xué)術(shù)研討會暨中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2012年學(xué)術(shù)年會和第七屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會會議論文集——T06飼料衛(wèi)生與安全專題[C];2012年

3 高偉霞;張偉;馮俊;王淑芳;宋存江;;解淀粉芽孢桿菌(Bacillus.amyloliquefaciens)LL3谷氨酸降解酶pgdS的敲除[A];2012年第五屆全國微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2012年

4 張淑梅;;內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌抗菌活性物質(zhì)和抗菌蛋白基因研究[A];第四屆全國微生物資源學(xué)術(shù)暨國家微生物資源平臺運(yùn)行服務(wù)研討會論文集[C];2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 孫玉英;殼聚糖酶的性質(zhì)及基因的克隆和表達(dá)研究[D];中國海洋大學(xué);2007年

2 劉懷偉;腐皮鐮孢菌殼聚糖酶CSN1的基因克隆、表達(dá)及其對致病性影響的研究[D];山東大學(xué);2010年

3 律倩倩;殼聚糖酶OU01底物結(jié)合與催化機(jī)理研究[D];中國海洋大學(xué);2015年

4 李松林;曲霉CJ22-326產(chǎn)殼聚糖酶基因的克隆、表達(dá)與定點(diǎn)突變[D];江南大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王彪;海洋微生物產(chǎn)殼聚糖酶基因的克隆和表達(dá)載體構(gòu)建[D];大連工業(yè)大學(xué);2013年

2 盧夢琪;殼聚糖誘導(dǎo)下淺玫瑰色鏈霉菌差異蛋白質(zhì)組學(xué)初步研究[D];上海海洋大學(xué);2016年

3 黃亮;煙曲霉殼聚糖酶在大腸桿菌中的分泌表達(dá)及發(fā)酵條件優(yōu)化[D];湖北大學(xué);2016年

4 周桂;殼聚糖的酶法降解研究[D];廣西大學(xué);2005年

5 段妍;產(chǎn)殼聚糖酶菌株的發(fā)酵條件優(yōu)化、殼聚糖酶的分離純化與酶學(xué)性質(zhì)研究[D];中國海洋大學(xué);2006年

6 胡遠(yuǎn)亮;產(chǎn)殼聚糖酶菌株的選育及產(chǎn)酶發(fā)酵工藝研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

7 朱利平;草酸青霉菌（Penicillium oxalicum）產(chǎn)殼聚糖酶發(fā)酵條件及酶性質(zhì)研究[D];華僑大學(xué);2011年

8 吳楠;海洋真菌的生長特性及產(chǎn)殼聚糖酶研究[D];大連工業(yè)大學(xué);2011年

9 徐偉玲;Mitsuaria sp.141殼聚糖酶基因的克隆、表達(dá)與酶學(xué)分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

10 單秋實(shí);殼聚糖酶高產(chǎn)菌株的篩選及酶學(xué)性質(zhì)的研究[D];吉林大學(xué);2015年

，

本文編號：1547432