本文關(guān)鍵詞： 布魯氏菌 dhbC基因 克隆 原核表達(dá) 生物信息學(xué)分析　出處：《中國畜牧獸醫(yī)》2017年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：試驗(yàn)旨在對羊種布魯氏菌dhbC基因進(jìn)行克隆及原核表達(dá),并對其表達(dá)蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析。參照GenBank中布魯氏菌M5-90株dhbC基因序列信息設(shè)計(jì)1對引物,通過PCR反應(yīng)擴(kuò)增獲得dhbC基因片段。將得到的dhbC基因連接到pMD20-T載體,構(gòu)建pMD20-T-dhbC重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌(E.coli)DH5α感受態(tài)細(xì)胞,提取質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定。鑒定正確后構(gòu)建pET28a-dhbC重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物用SDS-PAGE和Western blotting進(jìn)行分析。運(yùn)用生物信息學(xué)軟件DNAMAN及相關(guān)在線網(wǎng)站ProtParam、SOPMA及Protscale對dhbC基因編碼的氨基酸序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明,試驗(yàn)成功克隆了大小約為1 093bp的dhbC基因并進(jìn)行了蛋白表達(dá),表達(dá)的融合蛋白大小約為47ku,且主要以包涵體形式存在。dhbC蛋白的分子式為C1866H2968N544O562S15,分子質(zhì)量為42 496.3u,理論等電點(diǎn)(pI)為5.81,消光系數(shù)為33 835,不穩(wěn)定系數(shù)為36.76,疏水指數(shù)為86.19,總平均疏水性(GRAVY)為-0.215。預(yù)測在哺乳動物網(wǎng)織紅細(xì)胞的半衰期為30h,其二級結(jié)構(gòu)以α-螺旋(41.94%)和無規(guī)則卷曲(31.46%)為主。
[Abstract]:The aim of the experiment was to clone and prokaryotic express the dhbC gene of Brucella ovis, and to analyze its expression protein by bioinformatics. According to the sequence information of dhbC gene of Brucella M5-90 strain in GenBank, a pair of primers were designed. The dhbC gene fragment was amplified by PCR reaction. The obtained dhbC gene was ligated into pMD20-T vector to construct the pMD20-T-dhbC recombinant plasmid and transform the E. coli E. coli DH5 偽 competent cell. The plasmid was extracted and identified by enzyme digestion. After the identification was correct, the pET28a-dhbC recombinant plasmid was constructed. Transformation of E. coli BL21 (DE3). Expression of E. coli BL21DDE3 was induced by IPTG. The expression products were analyzed by SDS-PAGE and Western blotting. The amino acid sequences of dhbC gene were analyzed by bioinformatics software DNAMAN and ProtParamie SOPMA and Protscale. The results showed that, The dhbC gene, which is about 1093 BP in size, was cloned and expressed successfully. The size of the expressed fusion protein is about 47ku.DhbC protein mainly exists in the form of inclusion body. The molecular formula is C1866H2968N544O562S15, the molecular weight is 42,496.3u, the theoretical isoelectric point (Ip I) is 5.81, the extinction coefficient is 33,835, the coefficient of instability is 36.76, the hydrophobic index is 86.19, and the total average hydrophobic index is 86.19. The hydrophobicity of GRAVY was -0.215.The half life of mammalian reticulocyte was predicted to be 30 h, the secondary structure of which was 偽 -helix 41.94 and irregular crimping 31.46).
【作者單位】： 海南大學(xué)熱帶農(nóng)林學(xué)院海南省熱帶動物繁育與疫病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室海口市動物基因工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31460670) 海南省重大科技計(jì)劃項(xiàng)目(ZDKJ2016017-01)
【分類號】：S852.614

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