本文關(guān)鍵詞： 禽致病性大腸桿菌 毒力島 SYBR Green Ⅰ qPCR　出處：《中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)》2017年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為建立定量檢測(cè)禽致病性大腸桿菌毒力島irp2基因的SYBR GreenⅠqPCR方法,設(shè)計(jì)特異性引物,用PCR擴(kuò)增irp2基因片段,克隆至載體p MD18-T,轉(zhuǎn)化DH5α細(xì)胞,提取陽(yáng)性重組質(zhì)粒。以重組質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)模板,建立定量檢測(cè)irp2基因的特異性熒光定量PCR方法,進(jìn)行特異性、靈敏度、重復(fù)性等性能評(píng)價(jià),并對(duì)臨床分離的187份疑似禽致病性大腸桿菌進(jìn)行irp2基因定量檢測(cè)。結(jié)果顯示,PCR擴(kuò)增片段的大小為261 bp,與Gen Bank中已知基因序列的同源性為100%,建立的qPCR方法 Ct值與標(biāo)準(zhǔn)品模板在4.1×100~2.3×1010copies/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,擴(kuò)增曲線呈"S"形,相關(guān)系數(shù)為0.978,斜率為-3.286。該方法與副雞嗜血桿菌、禽巴氏桿菌、雞毒支原體、新城疫病毒、禽流感病毒(H9N5)無(wú)交叉反應(yīng),靈敏度達(dá)到2.3×100copies/L,比常規(guī)PCR高1 000倍,重復(fù)性變異系數(shù)小于4.00%。使用建立的irp2 qPCR對(duì)采集的疑似禽致病性大腸桿菌病料進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè),陽(yáng)性檢出率為36.4%,顯著高于普通PCR檢測(cè)率。結(jié)果表明,建立了禽源大腸桿菌毒力島irp2基因的SYBR GreenⅠqPCR檢測(cè)方法,該方法適用于含HPI+毒力島致病性大腸桿菌的快速篩選、毒力基因及其轉(zhuǎn)錄水平的定量檢測(cè),可為禽大腸桿菌病防控提供技術(shù)支持。
[Abstract]:In order to establish a SYBR Green 鈪，

本文編號(hào)：1530661