本文關(guān)鍵詞： 黃瓜花葉病毒 序列分析 外殼蛋白 原核表達(dá) 蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)　出處：《生物技術(shù)通報(bào)》2017年08期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：克隆新疆辣椒LJ-10 CMV基因組片段,并進(jìn)行序列分析,構(gòu)建CMV CP基因的原核表達(dá)載體,并制備CP基因的多克隆抗體。利用RT-PCR技術(shù),克隆新疆辣椒LJ-10 CMV的RNA1(3 357 nt)、RNA2(3 042 nt),RNA3(2 212 nt)全基因組片段,與Gen Bank上登陸的CMV亞組IA、亞組IB、亞組Ⅱ分離物進(jìn)行序列分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹分析。將LJ-10 CMV CP基因克隆到原核表達(dá)載體p ET-22b中,在大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá)純化,以純化的重組蛋白為抗原免疫兔子,制備CMV特異性抗血清,并進(jìn)行間接ELISA和Western blotting分析。結(jié)果顯示,成功克隆了新疆辣椒LJ-10 CMV的RNA1、RNA2、RNA3全基因組片段,序列分析及系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明,該分離物屬于CMV亞組IB。成功構(gòu)建了LJ-10 CMV CP基因的原核表達(dá)載體p ET-CMV-CP,在大腸桿菌BL21(DE3)中經(jīng)IPTG誘導(dǎo)獲得了與預(yù)期大小一致的分子量約為27 k D的重組蛋白,制備了CMV的特異性抗血清。間接ELISA和Western blotting分析表明,制備的抗血清效價(jià)為1:500-1 000。新疆辣椒LJ-10 CMV分離物屬于CMV亞組IB,成功構(gòu)建了LJ-10 CMV CP基因的原核表達(dá)載體,制備了相應(yīng)的多克隆抗體。
[Abstract]:The genomic fragment of LJ-10 CMV of Xinjiang pepper was cloned and sequenced. The prokaryotic expression vector of CMV CP gene was constructed, and the polyclonal antibody of CP gene was prepared. The whole genome fragment of Xinjiang pepper LJ-10 CMV was cloned from RNA1(3 357ntTntHN (3 042 nt), and sequenced and phylogenetic tree analysis were performed with CMV subgroup IA3, subgroup II isolated from Gen Bank. The LJ-10 CMV CP gene was cloned into the prokaryotic expression vector p#en8#, and the gene was cloned into the prokaryotic expression vector p#en8#. The purified recombinant protein was used as antigen to immunize rabbits to prepare CMV specific antiserum. Indirect ELISA and Western blotting analysis were carried out. The results showed that the whole genome fragment of Xinjiang pepper LJ-10 CMV RNA1 RNA2RNA2RNA3 was cloned successfully. Sequence analysis and phylogenetic tree analysis show that, The isolate belongs to CMV subgroup IBB.The prokaryotic expression vector pET-CMV-CPof LJ-10 CMV CP gene was successfully constructed, and the recombinant protein with a molecular weight of about 27 KD was obtained by IPTG induction in E. coli BL21DE3. The specific antiserum of CMV was prepared. Indirect ELISA and Western blotting analysis showed that the titer of the prepared antiserum was 1: 500-1 000. LJ-10 CMV isolated from Xinjiang pepper belonged to CMV subgroup, and the prokaryotic expression vector of LJ-10 CMV CP gene was successfully constructed. The corresponding polyclonal antibody was prepared.
【作者單位】： 石河子大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院石河子大學(xué)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31460466)
【分類號(hào)】：S436.418

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1528762