本文關(guān)鍵詞： 大片吸蟲 α-微管蛋白基因 表達(dá) 診斷候選抗原　出處：《中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)》2017年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為鑒定大片吸蟲α-微管蛋白基因(FgAT),并分析其作為診斷抗原的可行性,根據(jù)肝片吸蟲的基因組及轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)設(shè)計(jì)α-微管蛋白基因的擴(kuò)增引物,以大片吸蟲總RN A為模板,通過RT-PCR獲得大片吸蟲的FgAT基因;對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析及鑒定,然后構(gòu)建pGEX-6P-1(+)-FgAT重組表達(dá)載體,在大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),再對(duì)純化的目的蛋白進(jìn)行SDS-PAGE和Western-blot分析。結(jié)果表明,大片吸蟲FgAT基因的大小為1 356 bp,編碼452個(gè)氨基酸殘基。生物信息學(xué)分析表明,FgAT二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)以無規(guī)卷曲為主,抗原表位在整個(gè)序列中均有存在。優(yōu)化后的α-微管蛋白為可溶性表達(dá),Western-blot分析結(jié)果表明其具有良好的免疫反應(yīng)性。本研究首次克隆并鑒定了大片吸蟲α-微管蛋白基因,表達(dá)的重組蛋白具有良好的免疫反應(yīng)性,該蛋白是潛在的大片吸蟲診斷靶標(biāo)。
[Abstract]:In order to identify the 偽 -tubulin gene of paragonimus macrocephala, and analyze its feasibility as diagnostic antigen, a primer for amplification of 偽 -tubulin gene was designed according to the genomic and transcriptional data of paragonimiasis, and the total RNA of paragonimiasis was used as a template. The FgAT gene of paragonimiasis was obtained by RT-PCR, then the recombinant expression vector pGEX-6P-1 (pGEX-6P-1) was constructed by bioinformatics analysis and identification. The purified target protein was analyzed by SDS-PAGE and Western-blot. The result showed that the size of FgAT gene was 1 356 BP, encoding 452 amino acid residues. Bioinformatics analysis showed that the secondary structure of FGAT was mainly predicted by random coils. The antigenic epitopes were present in the whole sequence. The optimized 偽 -tubulin was expressed in a soluble way and showed good immunoreactivity. In this study, the 偽 -tubulin gene was cloned and identified for the first time. The expressed recombinant protein has good immunoreactivity and is a potential diagnostic target for paragonimiasis.
【作者單位】： 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室甘肅省動(dòng)物寄生蟲病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973)項(xiàng)目(2015CB150300)
【分類號(hào)】：S852.7

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本文編號(hào)：1528147