本文關(guān)鍵詞： 絲氨酸羧肽酶 雅致放射毛霉 克隆表達(dá) 酶活　出處：《華南理工大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：雅致放射毛霉是生產(chǎn)腐乳、臘八豆、豆豉等風(fēng)味食品的主要菌種,其能分泌多種蛋白酶,對(duì)腐乳發(fā)酵后期的風(fēng)味物質(zhì)的形成有很重要的作用。蛋白酶是催化蛋白質(zhì)中肽鍵水解的酶,到本世紀(jì)初,已經(jīng)報(bào)導(dǎo)的微生物蛋白酶估計(jì)超過900種,生物體的生理活動(dòng)和疾病的發(fā)生如食物的消化吸收、血液的凝固、溶血作用、炎癥、血壓調(diào)節(jié)、細(xì)胞分化自溶,機(jī)體衰老、癌癥轉(zhuǎn)移、生理活性肽的活化等,都與蛋白酶有關(guān)。蛋白酶涉及到生活的各個(gè)方面,與人類生活息息相關(guān)。絲氨酸蛋白酶是一類以絲氨酸為活性中心的重要的蛋白水解酶,在生物有機(jī)體中起著重要而廣泛的生理作用。絲氨酸羧肽酶是一類屬于α/β水解酶家族的真核生物蛋白水解酶,屬于SC族羧肽酶中的S10家族,主要存在于植物或真菌的液泡和動(dòng)物的溶酶體內(nèi),目前已從植物和真菌中分離到大量的絲氨酸羧肽酶。本論文首先對(duì)雅致放射毛霉轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中的羧肽酶進(jìn)行了分析,一共7種羧肽酶,主要分布在M28、S28和S10家族中,對(duì)這7種羧肽酶進(jìn)行了基因序列、所屬家族和進(jìn)化關(guān)系等生物信息學(xué)的分析。隨后進(jìn)一步培養(yǎng)觀察了雅致放射毛霉1-3 d在麩皮培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)形態(tài),并成功克隆得到了雅致放射毛霉羧肽酶基因的全長(zhǎng)基因AecpY,通過構(gòu)建重組表達(dá)菌株p ICh-AecpY-GS115,成功表達(dá)并得到了羧肽酶rAecpY。經(jīng)過對(duì)酶液進(jìn)行純化脫鹽等處理得到較高純度的目標(biāo)蛋白,并對(duì)該羧肽酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了進(jìn)一步的研究,研究結(jié)果表明:rAecpY的最高酶活在pH為5時(shí),此羧肽酶適合在弱酸性條件下進(jìn)行反應(yīng),屬于酸性蛋白酶一類;在40℃時(shí)酶活達(dá)到最高,20℃-50℃范圍內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性;抑制劑PMSF對(duì)其酶活影響較大,抑制劑為EDTA時(shí),酶活受到的影響非常小,由此可推斷蛋白酶為絲氨酸羧肽酶;金屬離子Zn~(2+)和Mn~(2+)對(duì)酶活有一定的促進(jìn)作用,而Cu~(2+)和Fe~(2+)則對(duì)酶活有抑制作用。
[Abstract]:In this paper , a kind of eukaryotic proteolytic enzyme , which has been reported at the beginning of this century , is a kind of eukaryotic proteolytic enzyme which has been reported at the beginning of this century . It is a kind of eukaryotic proteolytic enzyme which has been reported at the beginning of this century . It is a kind of eukaryotic proteolytic enzyme which has been reported at the beginning of this century .

【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：Q78;Q936

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本文編號(hào)：1519130