本文關(guān)鍵詞： 甜菜夜蛾 Bt殺蟲蛋白 堿性磷酸酶 受體蛋白　出處：《植物保護學(xué)報》2017年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為探究甜菜夜蛾Spodoptera exigua中腸堿性磷酸酶(alkaline phosphatase protein 2,ALP2)是否為Cry1Ac殺蟲蛋白的受體,采用同源克隆和RACE技術(shù)克隆了編碼alp2基因的完整c DNA序列,利用熒光定量PCR比較了甜菜夜蛾幼蟲中腸不同齡期ALP2表達量的差異,利用Ligand blot方法檢測了中腸ALP2與Cry1Ac殺蟲蛋白的結(jié)合。結(jié)果表明,alp2基因序列全長1 629 bp(Gen Bank序列號為KP420013),編碼542個氨基酸,預(yù)測在氨基酸序列N端包含1個由21個氨基酸組成的信號肽,在C端存在1個GPI修飾的錨定位點,且在整個氨基酸序列中存在多個糖基化修飾位點。在整個甜菜夜蛾幼蟲期均有ALP2表達,但不同齡期的表達量差異顯著,1齡幼蟲期表達量最低,4齡幼蟲期最高。Ligand blot方法檢測結(jié)果表明原核表達的ALP2片段與活化的Cry1Ac殺蟲蛋白可以結(jié)合。研究表明,甜菜夜蛾中腸的ALP2可能是Cry1Ac的受體之一。
[Abstract]:In order to investigate whether the midgut alkaline phosphatase (ALP2) of Spodoptera exigua Spodoptera exigua is the receptor of Cry1Ac insecticidal protein, the complete c DNA sequence encoding alp2 gene was cloned by homologous cloning and RACE techniques. The difference of ALP2 expression in midgut of Spodoptera exigua larvae was compared by fluorescence quantitative PCR. The binding of midgut ALP2 to Cry1Ac insecticidal protein was detected by Ligand blot method. The results showed that the sequence number of 1 629 bp(Gen Bank was KP42001313, encoding 542 amino acids. It was predicted that there was a signal peptide consisting of 21 amino acids at the N end of amino acid sequence. There was a GPI modified anchoring site in C terminal, multiple glycosylation sites in the whole amino acid sequence, and ALP2 expression in the whole larval stage of Spodoptera exigua. However, there were significant differences in the expression levels among different ages. The lowest expression level in the 1st instar larvae and the highest expression in the 4th instar stage. The results of detection by the method of. Ligand blot showed that the ALP2 fragments expressed in prokaryotic cells could bind to the activated Cry1Ac insecticidal protein. ALP2 in the midgut of Spodoptera exigua may be one of the receptors for Cry1Ac.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所植物病蟲害生物學(xué)國家重點實驗室;
【基金】：國家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(2014ZX08011-002)
【分類號】：S433.4

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本文編號：1513883