本文關(guān)鍵詞： 金磁微粒層析 全血直擴 口腔拭子 MTHFR　出處：《西北大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：分子生物基因組學研究需要高通量、低成本、可靠的生物樣品采集方法和處理的方法�；驒z測傳統(tǒng)方法常依靠純化的DNA樣本,但是往往純化DNA的過程耗時,成本較高,步驟復雜,且每一步過程中有產(chǎn)生交叉污染的可能,本研究基于PCR-金磁微粒層析法建立了一種直接采用全血或口腔拭子樣本,無需提取基因組DNA,通過ARMS-PCR擴增進行基因分型的方法(簡稱直擴),對亞甲基四氫葉酸還原酶蛋白編碼基因(MTHFR)C677T多態(tài)性進行檢測。特異性的區(qū)分為3種基因型,即CC型(野生型),CT型(雜合突變型),和TT型(純合突變型)。MTHFR蛋白是葉酸代謝等中至關(guān)重要的酶,它活性的變化會引起同型半胱氨酸升高等從而導致多種遺傳性疾病的發(fā)生。因此建立一種檢測MTHFR C677T基因多態(tài)性的方法是很有意義的。本方法檢測樣本種類為臨床使用廣泛的全血樣本,及無創(chuàng)取樣的口腔拭子樣本,僅對樣本做簡單預處理即可直接進行PCR擴增分型,省去提取核酸的繁雜步驟,且基于金磁微粒層析系統(tǒng),擴增采用防污染UNG酶體系,擴增完成后只需10分鐘就可以得到目視化結(jié)果,總時間僅為1小時30分鐘。本檢測方法經(jīng)濟,便捷,準確度高,無需大型儀器及專業(yè)人員。臨床樣本驗證,全血樣本200例,口腔拭子樣本50例,準確率均為100%。我們將在此基礎上開發(fā)應用于更多的基因多態(tài)性研究,及疾病研究的基因分型產(chǎn)品,有望在臨床上廣泛應用。
[Abstract]:Molecular biogenomics requires high throughput, low cost and reliable methods for collecting and processing biological samples. Traditional methods for gene detection often rely on purified DNA samples, but the process of DNA purification is often time-consuming and costly. The steps are complicated, and there is the possibility of cross contamination in each step. In this study, a direct blood or oral swab sample was established based on PCR- gold magnetic particle chromatography. The polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase protein coding gene (MTHFR- C677T) was detected by ARMS-PCR amplification without extraction of genomic DNA.These genotypes were specifically classified into three genotypes. In other words, CC (wild type) CT (heterozygous mutant) and TT (homozygous mutants). MTHFR protein is an important enzyme in folic acid metabolism. The change of its activity will lead to the increase of homocysteine, which will lead to the occurrence of many kinds of hereditary diseases. Therefore, it is meaningful to establish a method to detect the polymorphism of MTHFR C677T gene. Using a wide range of whole blood samples, And non-invasive oral swab samples, PCR amplification and typing can be carried out directly by simply pretreating the samples, eliminating the complicated steps of extracting nucleic acids, and using the anti-contamination UNG enzyme system based on the gold magnetic particle chromatography system. It only takes 10 minutes to obtain visual results after amplification, and the total time is only 1 hour and 30 minutes. This method is economical, convenient, accurate, and does not need large instruments and professionals. Oral swabs were collected in 50 cases with the accuracy of 100. We will develop and apply to more gene polymorphism studies and genotyping products for disease research, which is expected to be widely used in clinical practice.
【學位授予單位】：西北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R440

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本文編號：1502961