發(fā)布時(shí)間：2018-02-10 03:36

  本文關(guān)鍵詞： 弓形蟲 微線體蛋白5 微線體蛋白16 序列分析 DNA疫苗　出處：《安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：弓形蟲作為一種呈世界性分布的專性細(xì)胞內(nèi)寄生的頂覆門原蟲,嚴(yán)重威脅著人類的健康,影響畜牧業(yè)的發(fā)展。孕婦感染弓形蟲,會(huì)造成流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、胎兒畸形。在畜牧行業(yè),尤其是對(duì)山羊、綿羊以及豬等家畜,弓形蟲感染會(huì)導(dǎo)致家畜的流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎等,給畜牧行業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究首次研究不同宿主、地理來源以及基因型的剛地弓形蟲蟲株的TgMIC5和TgMIC16基因的序列變異情況,并驗(yàn)證其是否能夠作為剛地弓形蟲種群分析和基因分型的遺傳標(biāo)記。序列分析揭示,TgMIC5基因序列的遺傳變異率僅為0.2-1.3%,無法有效區(qū)分不同基因型的弓形蟲蟲株,不能作為基因分型的標(biāo)記分子用于弓形蟲種群遺傳學(xué)研究;TgMIC16基因序列的遺傳變異率為0.1-0.9%,系統(tǒng)發(fā)育樹分析表明TgMIC16基因能夠區(qū)分不同基因型弓形蟲,而PCR-RFLP方法進(jìn)一步驗(yàn)證了TgMIC16基因能夠區(qū)分不同基因型弓形蟲。因此,TgMIC16基因是一個(gè)潛在的用于種群研究和基因分型的標(biāo)記基因。本研究還對(duì)TgMIC5、TgMIC16以及TgGRA16單獨(dú)和混合免疫的保護(hù)性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果表明:免疫組小鼠血清中的抗體IgG以及抗體亞類IgG1和IgG2a的含量均有明顯的升高;CD3+CD4+CD8-輔助性T細(xì)胞以及CD3+CD8+CD4-T細(xì)胞的含量明顯增高。說明pVAX-MIC5和pVAX-MIC16能誘導(dǎo)小鼠機(jī)體產(chǎn)生高水平的Th 1型細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答反應(yīng)。且經(jīng)弓形蟲RH株致死性和PRU株慢性攻擊感染后,單基因免疫組和聯(lián)合免疫組小鼠都能有效延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間(空白對(duì)照組:4.1±0.31d、p VAX-MIC5:8.8±0.55d、pVAX-MIC16:7.8±0.33d、pVAX-MIC5+MIC16:10±0.63d、pVAX-MIC5+MIC16+GRA16:12.5±1.06d),減少腦包囊荷蟲率(pVAX-MIC5:28.00%、pVAX-MIC16:39.44%、pVAX-MIC5+MIC16:48.06%、pVAX-MIC5+MIC16+GRA16:58.44%),且聯(lián)合免疫的免疫效果顯著高于單基因免疫。本研究說明這兩個(gè)抗原具有良好的免疫原性,能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生高水平的免疫應(yīng)答以抵抗弓形蟲的感染,且二者的聯(lián)合適合于混合疫苗的研究。
[Abstract]:Toxoplasma gondii, as a worldwide specialized cell parasitic protozoa, is a serious threat to human health and affects the development of animal husbandry. Pregnant women infected with Toxoplasma gondii can cause miscarriage, stillbirth and fetal malformation. Especially for domestic animals such as goats, sheep and pigs, Toxoplasma gondii infection can lead to abortion, stillbirth, mummy fetus and so on. Sequence variations of TgMIC5 and TgMIC16 genes of Toxoplasma gondii strains from geographic sources and genotypes, The genetic variation rate of TgMIC5 gene was only 0.2-1.3, which could not be used to distinguish Toxoplasma gondii strains with different genotypes, the results showed that TgMIC5 gene could not be used as a genetic marker for Toxoplasma gondii population analysis and genotyping, and the genetic variation rate of TgMIC5 gene sequence was only 0.2-1.3. Genetic study of Toxoplasma gondii TgMIC16 gene sequence genetic variation rate of TgMIC16 gene was 0.1-0.90.The phylogenetic tree analysis showed that TgMIC16 gene could distinguish different genotypes of Toxoplasma gondii. The PCR-RFLP method further verified that the TgMIC16 gene can distinguish different genotypes of Toxoplasma gondii. Therefore, the TgMIC16 gene is a potential marker gene for population research and genotyping. TgMIC5, TgMIC16 and TgGRA16 are also immunized separately and mixed. The results showed that the levels of antibody IgG, antibody subclass IgG1 and IgG2a in serum of immunized mice were significantly increased, and the contents of CD3 CD4 CD8-helper T cells and CD3 CD8 CD4-T cells were significantly increased. The results showed that pVAX-MIC5 and pVAX-MIC16 could induce high level of Th 1 cellular and humoral immune responses in mice, and were infected by Toxoplasma gondii RH strain and PRU strain by chronic attack. The survival time of mice in single gene immunization group and combined immunization group was significantly prolonged (blank control group: 4.1 鹵0.31 d VAX-MIC5:8.8 鹵0.55 d pVAX-MIC167.8 鹵0.33 d pVAX-MIC5 MIC16:10 鹵0.63 d pVAX-MIC5 MIC16 GRA16:12.5 鹵1.06 d), and the rate of pVAX-MIC5: 28.00% pVAX-MIC5: pVAX-MIC1639.44 DX mice was significantly higher than that of pVAX-MICX-5 MIC16 GRA1658.440.The immune effect of the combined immunization was significantly higher than that of the single gene immunized mice with pVAX-MIC5, pVAX-MIC5, pVAX-MIC5, pVAX-MIC5, pVAX-MIC5, pVAX-MIC5, pVAX-MIC5, pVAX-MIC5, pVAX-MIC5, pVAX-MIC5, pVAX-MIC5 and pVAX-MIC5. Studies have shown that these two antigens have good immunogenicity. It can induce a high level of immune response to Toxoplasma gondii infection in mice, and the combination of the two is suitable for the study of mixed vaccine.
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.4

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 茍?jiān)獎(jiǎng)?犬弓形蟲病的診斷與防治[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2000年11期

2 李天營(yíng),肖鵬,肖猛;犬弓形蟲病的診斷與治療[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2000年02期

3 洪雷;牛弓形蟲病[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2000年04期

4 李天營(yíng),肖鵬;犬弓形蟲病的診斷與治療[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2001年02期

5 艾小生;豬急性神經(jīng)型弓形蟲病的診治[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2001年12期

6 徐慧中,胡銀云;某豬場(chǎng)暴發(fā)弓形蟲病的診治[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2001年11期

7 陳敏;規(guī)模豬場(chǎng)暴發(fā)弓形蟲病的報(bào)告[J];福建畜牧獸醫(yī);2002年05期

8 沈杰;我國(guó)寄生蟲學(xué)界對(duì)弓形蟲病認(rèn)識(shí)上的飛躍[J];中國(guó)獸醫(yī)寄生蟲病;2004年02期

9 王紹琛;犬弓形蟲病的診治[J];福建畜牧獸醫(yī);2004年05期

10 高昆賓;劉鳴雁;趙云燕;;一起肉牛弓形蟲病的診治[J];養(yǎng)殖技術(shù)顧問;2006年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 朱引潔;吳文學(xué);賀國(guó)強(qiáng);;弓形蟲病的診斷現(xiàn)狀[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2006年

2 李輝;張健;;一例犬弓形蟲病的診斷與治療[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)小動(dòng)物醫(yī)學(xué)分會(huì)第四次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)外科學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（2）[C];2009年

3 李祥瑞;;弓形蟲病的流行的新趨勢(shì)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)食品衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

4 崔平;秦建華;方素芳;;河北省動(dòng)物弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲學(xué)分會(huì)第五次代表大會(huì)暨第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

5 藺智兵;張厚雙;曹杰;周勇志;李國(guó)清;周金林;;弓形蟲real-time PCR檢測(cè)方法的建立和初步應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲學(xué)分會(huì)第六次代表大會(huì)暨第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

6 楊娜;穆名楊;李紅魁;何建斌;;中國(guó)東北地區(qū)雞源弓形蟲的流行病學(xué)調(diào)查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

7 劉晶;蔡進(jìn)忠;于晉海;夏兆飛;林德貴;劉群;;幾種動(dòng)物弓形蟲病血清流行病學(xué)的初步調(diào)查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2006年

8 王權(quán);蔣蔚;荊振宇;陳永軍;楊康;宋寧寧;崔常勇;;五種中藥體外抗弓形蟲抑制效果的研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲學(xué)分會(huì)第六次代表大會(huì)暨第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

9 鞏薇;衛(wèi)禮;王吉;賀爭(zhēng)鳴;邢瑞昌;;實(shí)驗(yàn)小鼠弓形蟲檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[A];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

10 陳西岐;劉秀蘭;張克功;于德順;;貓弓形蟲病的診治[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲學(xué)分會(huì)第五次代表大會(huì)暨第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 林曉麗;養(yǎng)貓者易感染弓形蟲應(yīng)謹(jǐn)防患精神分裂癥[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2007年

2 小郭;弓形蟲病危害不輕[N];中國(guó)商報(bào);2000年

3 戴培紅;北京友誼醫(yī)院探索治療弓形蟲病的新途徑[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

4 本報(bào)記者 蔡玉冰 通訊員 黃賢君;弓形蟲沒你想的可怕[N];廣東科技報(bào);2012年

5 李水源;當(dāng)前豬場(chǎng)弓形蟲病的防控[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2013年

6 本報(bào)記者 白軼南;弓形蟲病 危及胎兒健康[N];保健時(shí)報(bào);2005年

7 臨城縣畜牧局 李路民;豬得弓形蟲病 吃了貓的虧[N];河北科技報(bào);2002年

8 北京友誼醫(yī)院北京熱帶醫(yī)學(xué)研究所研究員 甘紹伯 副主任醫(yī)師 馮曼玲;弓形蟲——寵物的“寵物”[N];健康報(bào);2000年

9 連孝華;孕婦玩貓狗易危害胎兒[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2007年

10 王志海 邵芹;犬弓形蟲病[N];中國(guó)畜牧報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 呂剛;弓形蟲表面抗原蛋白5的結(jié)構(gòu)分析及免疫學(xué)研究[D];山東大學(xué);2015年

2 龔國(guó)華;上海城區(qū)犬、貓弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查及藥物治療的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 尹青;弓形蟲Δbag1Δku80株的構(gòu)建及其作為貓弓形蟲病疫苗候選株的免疫原性、安全性和效力的評(píng)價(jià)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 徐鵬;弓形蟲新毒力基因TgMAPK1表達(dá)特性及其初步功能研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 張步彩;泰州地區(qū)豬弓形蟲血清流行病學(xué)調(diào)查及中藥治療急性感染弓形蟲小鼠效果的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

6 陳金鈴;CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞失能參與弓形蟲分泌排泄抗原致小鼠早孕流產(chǎn)的機(jī)制[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

7 楊鳴發(fā);弓形蟲RH株脯氨酰氨氨基肽酶特征與功能性研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

8 張括;人—兔嵌合型抗弓形蟲IgM抗體基因庫(kù)的構(gòu)建和抗弓形蟲IgG抗體參考物質(zhì)的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

9 張偉超;TALEN和CRISPR技術(shù)在弓形蟲致病機(jī)制研究中的應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

10 吳亮;弓形蟲“遲發(fā)型死亡”機(jī)制的研究[D];江蘇大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊曉宇;重組弓形蟲TRXL蛋白和EN02蛋白免疫保護(hù)力的評(píng)價(jià)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 王衛(wèi)艷;弓形蟲SAG2、GRA6、GRA7基因的重組表達(dá)及應(yīng)用研究[D];濟(jì)南大學(xué);2015年

3 王成雙;弓形蟲ROP46基因缺失蟲株構(gòu)建及其生物學(xué)特性分析[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2016年

4 趙禹;弓形蟲棒狀體頸部蛋白5和10基因的免疫保護(hù)作用及其基因缺失株的構(gòu)建[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 寇金華;豬弓形蟲感染ELISA和膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)方法的建立與初步應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2016年

6 萬俐娟;弓形蟲毒力因子ROP18促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

7 古一;弓形蟲CK1α缺失株感染小鼠毒力試驗(yàn)及機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

8 張曉川;苦參生物堿類成分抗弓形蟲作用的研究[D];延邊大學(xué);2016年

9 王貝貝;弓形蟲pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重組基因的構(gòu)建、表達(dá)及其免疫保護(hù)作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

10 馬磊;弓形蟲蛋白激酶MAPK1在宿主炎癥小體通路中的功能研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：1499562