銅綠假單胞菌對(duì)白念珠菌生物活性的體外影響及對(duì)菌絲特異性基因表達(dá)的調(diào)控
發(fā)布時(shí)間:2018-02-05 05:03
本文關(guān)鍵詞: 白念珠菌 銅綠假單胞菌 菌絲 生物膜 菌絲特異性基因 出處:《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文 論文類型:學(xué)位論文
【摘要】:目的觀察銅綠假單胞菌(PA)對(duì)白念珠菌(CA)標(biāo)準(zhǔn)株ATCC90028形態(tài)轉(zhuǎn)換及生物膜的體外影響,并進(jìn)一步了解部分菌絲特異性基因(ALS3、HWP1、ECE1、HGC1)的表達(dá)情況。方法采用抑菌圈法了解50株P(guān)A對(duì)CA平板生長(zhǎng)的抑菌作用,分別取抑菌圈明顯和無(wú)抑菌圈形成的PA各3株,取各自的上清液加入促菌絲培養(yǎng)液中,6h后鏡下觀察CA形態(tài)轉(zhuǎn)換情況,以LB液體培養(yǎng)基作為對(duì)照;采用96孔板半定量法(MTT)方法,向促菌絲培養(yǎng)液RPMI-1640 100ul中加入兩倍原濃度的PA上清液100ml,培養(yǎng)24h后測(cè)定上述上清液對(duì)CA生物膜增殖的影響;采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(rt-q PCR)方法,提取白念珠菌總RNA,逆轉(zhuǎn)錄為c DNA,擴(kuò)增目的基因,數(shù)據(jù)分析選擇相對(duì)定量2-△△CT方法,了解菌絲特異性基因在不同PA上清液影響下與對(duì)照組相比變化的倍數(shù)情況。結(jié)果50株P(guān)A中有19株出現(xiàn)了明顯的抑菌圈(19/50),邊界清晰,但直徑大小不等,且與PA是否產(chǎn)色素有關(guān);培養(yǎng)6h后鏡下觀察只有抑菌圈明顯的3株P(guān)A上清液抑制了CA向菌絲相的轉(zhuǎn)換,以孢子和出芽形態(tài)生長(zhǎng),未見菌絲形成;其他3株與對(duì)照組相比鏡下未見明顯差別。抑菌圈明顯的3株P(guān)A上清液能夠阻礙生物膜的增殖(p0.01),無(wú)抑菌圈組的PA上清中也有一株出現(xiàn)阻礙生物膜增殖的作用(p0.05)。在rt-q PCR實(shí)驗(yàn)中,除了一株P(guān)A上清液對(duì)HWP1和ECE1基因的抑制作用無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外,其余各株P(guān)A上清液均能明顯抑制菌絲特異性基因(ALS3、HWP1、ECE1、HGC1)的表達(dá),程度不一,不明顯者約占對(duì)照組的1/2,明顯者可到達(dá)1/50。結(jié)論部分PA上清液能夠有效抑制體外CA的早期形態(tài)轉(zhuǎn)換,且對(duì)生物膜的增值有阻礙作用;大部分PA上清液對(duì)CA菌絲特異性基因都有抑制表達(dá)作用,但程度差距較大。
[Abstract]:Objective To investigate the effect of PA on the proliferation of CA biofilm in vitro . The results showed that the supernatant of PA could inhibit the proliferation of biofilm .
【學(xué)位授予單位】:安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號(hào)】:R519.3
【參考文獻(xiàn)】
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,本文編號(hào):1492201
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