本文關鍵詞： 白念珠菌 銅綠假單胞菌 菌絲 生物膜 菌絲特異性基因　出處：《安徽醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的觀察銅綠假單胞菌(PA)對白念珠菌(CA)標準株ATCC90028形態(tài)轉(zhuǎn)換及生物膜的體外影響,并進一步了解部分菌絲特異性基因(ALS3、HWP1、ECE1、HGC1)的表達情況。方法采用抑菌圈法了解50株PA對CA平板生長的抑菌作用,分別取抑菌圈明顯和無抑菌圈形成的PA各3株,取各自的上清液加入促菌絲培養(yǎng)液中,6h后鏡下觀察CA形態(tài)轉(zhuǎn)換情況,以LB液體培養(yǎng)基作為對照;采用96孔板半定量法(MTT)方法,向促菌絲培養(yǎng)液RPMI-1640 100ul中加入兩倍原濃度的PA上清液100ml,培養(yǎng)24h后測定上述上清液對CA生物膜增殖的影響;采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(rt-q PCR)方法,提取白念珠菌總RNA,逆轉(zhuǎn)錄為c DNA,擴增目的基因,數(shù)據(jù)分析選擇相對定量2-△△CT方法,了解菌絲特異性基因在不同PA上清液影響下與對照組相比變化的倍數(shù)情況。結果50株PA中有19株出現(xiàn)了明顯的抑菌圈(19/50),邊界清晰,但直徑大小不等,且與PA是否產(chǎn)色素有關;培養(yǎng)6h后鏡下觀察只有抑菌圈明顯的3株PA上清液抑制了CA向菌絲相的轉(zhuǎn)換,以孢子和出芽形態(tài)生長,未見菌絲形成;其他3株與對照組相比鏡下未見明顯差別。抑菌圈明顯的3株PA上清液能夠阻礙生物膜的增殖(p0.01),無抑菌圈組的PA上清中也有一株出現(xiàn)阻礙生物膜增殖的作用(p0.05)。在rt-q PCR實驗中,除了一株PA上清液對HWP1和ECE1基因的抑制作用無統(tǒng)計學差異外,其余各株PA上清液均能明顯抑制菌絲特異性基因(ALS3、HWP1、ECE1、HGC1)的表達,程度不一,不明顯者約占對照組的1/2,明顯者可到達1/50。結論部分PA上清液能夠有效抑制體外CA的早期形態(tài)轉(zhuǎn)換,且對生物膜的增值有阻礙作用;大部分PA上清液對CA菌絲特異性基因都有抑制表達作用,但程度差距較大。
[Abstract]:Objective To investigate the effect of PA on the proliferation of CA biofilm in vitro . The results showed that the supernatant of PA could inhibit the proliferation of biofilm .

【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R519.3

【參考文獻】

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本文編號：1492201