水稻OsPIN1d基因克隆與轉(zhuǎn)化及其在水稻根負(fù)向光性中的作用
本文關(guān)鍵詞: 水稻 生長(zhǎng)素極性運(yùn)輸 OsPINd 負(fù)向光性 種子根 出處:《西北植物學(xué)報(bào)》2017年10期 論文類型:期刊論文
【摘要】:生長(zhǎng)素極性運(yùn)輸輸出載體OsPIN1基因家族可能參與調(diào)控水稻根負(fù)向光性,其中OsPIN1a和OsPIN1b參與水稻根負(fù)向光性已得到證實(shí)。為了研究OsPIN1d基因與水稻根負(fù)向光性形成的關(guān)系,依據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫中OsPIN1d(Accession number:BR000830)的核苷酸序列,設(shè)計(jì)特異性引物,通過RT-PCR從水稻根尖的cDNA中擴(kuò)增出完整的OsPIN1d基因全長(zhǎng)。生物信息學(xué)分析表明,OsPIN1d的序列全長(zhǎng)為1 497bp,編碼554個(gè)氨基酸,GC含量為64.08%;氨基酸序列多重比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建表明,OsPIN1d與水稻OsPIN1b、玉米OsPIN4以及擬南芥AtPIN2、OsPIN1c、OsPIN1a和AtPIN1等基因的遺傳距離較近。通過構(gòu)建融合超表達(dá)載體pCAMBIA-1301-OsPIN1d∷GFP,轉(zhuǎn)化并獲得其轉(zhuǎn)基因水稻,經(jīng)RT-PCR檢測(cè)和GUS染色結(jié)果顯示,外源片段已成功整合到水稻基因組內(nèi),并在根部高效表達(dá);受單側(cè)光照射后,轉(zhuǎn)基因水稻種子的根負(fù)向光性明顯大于野生型,且向光側(cè)OsPIN1d-GFP熒光密度明顯弱于背光側(cè)。研究表明,OsPIN1d參與了水稻根負(fù)向光性的IAA和NAA的運(yùn)輸,從而促進(jìn)了根負(fù)向光性的形成。
[Abstract]:The auxin polarity transport vector OsPIN1 gene family may be involved in the regulation of rice root negative light. In order to study the relationship between the OsPIN1d gene and the formation of the negative light of rice root, OsPIN1a and OsPIN1b have been proved to be involved in the negative light of rice root. According to the nucleotide sequence of OsPIN1d(Accession number: BR000830 in GenBank database, a specific primer was designed. The complete OsPIN1d gene was amplified by RT-PCR from cDNA of rice root tip. Bioinformatics analysis showed that the length of OsPIN1d was 1497 BP. The GC content of 554 amino acids was 64.08; Multiple amino acid sequence alignment and phylogenetic tree construction showed that OsPIN1d was associated with OsPIN1b in rice, OsPIN4 in maize and OsPIN1c in Arabidopsis thaliana AtPIN2. The genetic distance of genes such as OsPIN1a and AtPIN1 was close. The fusion superexpression vector pCAMBIA-1301-OsPIN1d: GFP was constructed. The transgenic rice was transformed and obtained. The results of RT-PCR detection and GUS staining showed that the exogenous fragments were successfully integrated into the rice genome and highly expressed in the roots. The negative light intensity of the transgenic rice seeds was significantly higher than that of the wild type, and the fluorescence density of OsPIN1d-GFP on the optically side was weaker than that on the backlight side. OsPIN1d was involved in the transport of IAA and NAA in rice roots, which promoted the formation of negative light in rice roots.
【作者單位】: 江蘇理工學(xué)院化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院;河南科技大學(xué)農(nóng)學(xué)院;紹興文理學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】:浙江省自然科學(xué)基金(LY14C130003) 國(guó)家自然科學(xué)基金(31071353) 江蘇省產(chǎn)學(xué)研前瞻聯(lián)合性研究基金(BY2015028-04)
【分類號(hào)】:S511
【正文快照】: 水稻(Oryza sativa L.)是重要的糧食作物,良好的根系發(fā)育對(duì)水分和養(yǎng)分吸收有著重要作用。根系生長(zhǎng)除了受重力作用外,光照亦可直接或間接地影響根系生長(zhǎng)、側(cè)根和根毛形成,以及根的向重性與向光性[1-2],相對(duì)于對(duì)植物向光性研究而言[3],前人對(duì)根負(fù)向光性的研究比較少[4-5]。研究
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,本文編號(hào):1491955
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