發(fā)布時間：2018-02-01 23:13

  本文關(guān)鍵詞： 豬偽狂犬病毒 gE基因 gD基因 克隆 序列分析　出處：《中國獸醫(yī)學(xué)報》2017年11期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：近年來,我國豬場內(nèi)很多規(guī)模化豬場的偽狂犬病病毒野毒呈陽性,大部分中小規(guī)模豬場和小養(yǎng)殖場感染情況更為糟糕,使得偽狂犬病病毒的變異率增加,給該病的防控帶來了更大的壓力。為了深入了解本病的流行情況及研制新型疫苗用于該病的防治,本研究在流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上從發(fā)生疑似偽狂犬病的2個豬場仔豬組織內(nèi)各分離到1株P(guān)RV野毒株,分別命名為LY株和YSH株。參照已發(fā)表的PRV gE和gD基因序列,設(shè)計合成2對分別擴(kuò)其全長的引物,使用高保真酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增,將擴(kuò)增得到的全長序列克隆到pEASY-Blunt載體中,并轉(zhuǎn)化Trans1-T1感受態(tài)細(xì)胞,挑取陽性菌落的質(zhì)粒進(jìn)行酶切、測序鑒定,并與國內(nèi)外其他毒株進(jìn)行比較分析,構(gòu)建遺傳進(jìn)化關(guān)系圖。結(jié)果表明,2毒株與國內(nèi)外其他毒株比較,gE、gD基因核苷酸序列的同源性分別為97.7%~100.0%和99.0%~100.0%;氨基酸序列的同源性分別為95.5%~100.0%和98.9%~100.0%,以gE、gD基因氨基酸序列建立的進(jìn)化樹分析結(jié)果顯示,近3~5年分離的PRVs形成一個相對獨(dú)立的新分支。經(jīng)過同源性及進(jìn)化分析,可知新分離的2株偽狂犬病病毒株與歐美株的親緣關(guān)系遠(yuǎn),與亞洲株內(nèi)中國株的親緣關(guān)系近,初步判定屬于國內(nèi)流行株,并可能存在一定的抗原變異,這為進(jìn)一步研究山東省豬群偽狂犬病病毒分子流行病學(xué)奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In recent years, China's wild strains of pseudorabies virus of swine in many large-scale pig farms were positive, the majority of small and medium-sized and small scale pig farms infection situation is worse, the variation of pseudorabies virus increased, has brought greater pressure to the prevention and control of the disease. In order to deeply understand the epidemic situation of the disease and the development of new vaccines for the prevention of the disease, 2 pig tissue in this study on the basis of the epidemiological survey from the suspected case of pseudorabies in piglets in the isolated 1 PRV field strains, which were named LY and YSH strains. PRV gE and gD gene sequence has been published in the design and synthesis of 2 respectively. Expanding the full-length primers for PCR amplification using high fidelity enzyme, the PCR sequences were cloned into pEASY-Blunt vector, and transformed into Trans1-T1 competent cells, the plasmid selected positive clones were identified by enzyme digestion, sequencing and identification. A comparative analysis of other strains at home and abroad, to construct the genetic evolutionary relationship diagram. The results showed that 2 strains and other strains at home and abroad, gE, gD gene nucleotide sequence homology were 97.7%~100.0% and 99.0%~100.0%; the homology of amino acid sequences were 95.5%~100.0% and 98.9%~100.0%, to gE, the result of phylogenetic analysis of gD gene amino acid sequence set that separation in the last 3~5 years PRVs formed a new branch independently. Through phylogenetic analysis, genetic relationship of the 2 isolated strains of pseudorabies virus strains and strains and far, and the genetic relationship among Chinese strains Asia strains near, tentatively identified domestic strains, and there may be antigenic variation of certain, which laid the foundation for further study on molecular epidemiology of pseudorabies virus in pigs in Shandong province.

【作者單位】： 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所山東省畜禽疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系疫病控制崗位項(xiàng)目(SDAIT-08-07) 山東省農(nóng)業(yè)重大應(yīng)用技術(shù)創(chuàng)新課題 山東省科技發(fā)展計劃(2014GNC111011) 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院青年英才培養(yǎng)工程;山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院青年科研基金項(xiàng)目(2014QNM40);山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院青年科研基金項(xiàng)目(2016YQN53)
【分類號】：S852.651
【正文快照】： *Corresponding author,E-mail:junli79@163.com豬偽狂犬病(pseudorabies,PR)也稱奧葉基氏病(Aujeszky disease)、傳染性延髓麻痹、奇癢癥,是由豬偽狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)引起的以發(fā)熱、奇癢、腦脊髓炎等為主要特征的一種烈性傳染病。PRV屬于皰疹病毒科(herpesvi

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本文編號：1483097