本文關鍵詞： 質粒 AmpC酶 聚合酶鏈反應 肺炎克雷伯菌 大腸埃希菌　出處：《中華醫(yī)院感染學雜志》2016年02期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的探討多重熒光PCR-探針熔解分析法應用于臨床分離大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中ampC耐藥基因的檢測方法,并評價該方法的臨床應用價值。方法收集醫(yī)院2009年7月-2010年6月的臨床分離菌株,首先采用頭孢西丁紙片法進行耐藥表型篩選,再同時應用傳統(tǒng)PCR技術與熒光PCR-探針熔解曲線法對臨床分離菌株進行檢測,并對ampC耐藥基因擴增產物進行DNA測序。結果經頭孢西丁紙片法篩選出176株對頭孢西丁不敏感臨床分離菌株,其中97株為肺炎克雷伯菌、79株為大腸埃希菌;在176株臨床分離株中,熒光PCR-探針熔解分析法檢測出36株ampC耐藥基因陽性菌株,包括18株DHA型、12株CIT型和5株EBC型,還有1株肺炎克雷伯菌同時含有DHA型和EBC型;而傳統(tǒng)PCR技術檢出32株ampC耐藥基因陽性,兩個檢測結果的符合率為97.7%;DNA測序后經BLAST比對,熒光PCR-探針熔解分析法檢測ampC基因型與所檢測目的基因型一致。結論熒光PCR-探針熔解分析法能高效檢測出質粒介導ampC耐藥基因,其方法簡便、敏感性高、特異性強,具有良好的臨床應用價值。
[Abstract]:Objective to investigate the application of multiplex fluorescence PCR- probe fusion assay in the detection of ampC resistance genes in clinical isolates of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae. The clinical application value of this method was evaluated. Methods the clinical isolates from July 2009 to June 2010 were collected and the resistant phenotypes were screened by cefoxitin disk method. At the same time, the traditional PCR technique and fluorescence PCR-probe melting curve method were used to detect the clinical isolates. The amplified products of ampC resistance gene were sequenced by DNA. Results 176 clinical isolates were screened by cefxitin disk method, 97 of which were Klebsiella pneumoniae. 79 strains were Escherichia coli. Among 176 clinical isolates, 36 ampC resistant gene positive strains were detected by fluorescence PCR- probe fusion analysis, including 18 DHA type 12 CIT and 5 EBC type. Another strain of Klebsiella pneumoniae contained both DHA and EBC types. 32 strains of ampC resistance genes were detected by traditional PCR technique, and the coincidence rate of the two results was 97.7%. DNA was sequenced and compared with BLAST. The detection of ampC genotypes by fluorescence PCR-probe fusion assay is consistent with that of the target genotypes. Conclusion fluorescence PCR-probe fusion assay can efficiently detect plasmide-mediated ampC resistance genes. The method is simple, sensitive and specific, and has good clinical application value.
【作者單位】： 廈門大學附屬第一醫(yī)院檢驗科;廈門大學生命科學院生物醫(yī)學科學系;廈門市中心血站;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81000762) 福建省自然科學基金資助項目(2013D002) 福建省衛(wèi)生廳青年基金資助項目(2010-2-90) 廈門科技局基金資助項目(3502z20089003)
【分類號】：R446.5
【正文快照】： 3.廈門市中心血站,福建廈門361004)β-內酰胺酶是導致臨床病原菌耐藥最主要的耐藥機制之一,C類β-內酰胺酶,即AmpC酶,不僅由染色體編碼產生,20世紀90年代以后,質粒介導AmpC酶逐漸在肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌等革蘭陰性桿菌中被發(fā)現(xiàn)[1],由于耐藥基因存在于質粒載體上,使ampC耐

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