本文關鍵詞： 造血發(fā)育 hoxb rapb 斑馬魚　出處：《第三軍醫(yī)大學學報》2017年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的為了發(fā)現(xiàn)在早期造血發(fā)育中關鍵的調(diào)控因子,利用hoxb4轉基因斑馬魚研究rap1b基因的表達變化情況,以期明確hoxb4與rap1b在早期造血發(fā)育中的關系。方法選取過表達hoxb4的斑馬魚系為研究對象,分為3組:實驗組(表達hoxb4-EGFP的斑馬魚),實驗對照組(表達EGFP的斑馬魚),空白對照組(野生型斑馬魚)。通過流式分選技術將實驗對照組和實驗組18hpf(斑馬魚胚胎受精發(fā)育18 h)、24、30、36、48hpf胚胎中帶有綠色熒光(enhanced green fluorescent protein,EGFP)信號的細胞分選出來,利用實時熒光定量PCR檢測分選出的細胞中的rap1b基因的表達變化;然后收集野生型斑馬魚多時相胚胎,制備rap1b基因的反義m RNA探針,通過胚胎原位雜交觀察探針在3組斑馬魚胚胎18、24、30、36、48hpf雜交信號表達部位。結果 q RT-PCR結果顯示實驗組30、36、48hpf的斑馬魚胚胎的rap1b基因的表達明顯增強(P0.05);制備了rap1b基因的反義m RNA探針,胚胎整體原位雜交結果顯示:rap1b基因在3組斑馬魚胚胎18~48hpf之間神經(jīng)發(fā)育和造血發(fā)育部位都有表達。結論在過表達hoxb4轉基因斑馬魚中rap1b基因表達有明顯的升高趨勢,提示rap1b基因與hoxb4基因可能共同參與調(diào)節(jié)早期造血發(fā)育過程。
[Abstract]:Objective to investigate the expression of rap1b gene by hoxb4 transgenic zebrafish in order to find the key regulatory factors in early hematopoietic development. Objective to clarify the relationship between hoxb4 and rap1b in early hematopoietic development. Methods zebrafish lines expressing hoxb4 were selected as the research object. They were divided into three groups: experimental group (zebrafish with hoxb4-EGFP expression) and experimental control group (zebrafish expressing EGFP). The control group (wild type zebrafish) was divided into experimental control group and experimental group (18 h after fertilization and development of zebrafish embryo for 18 h) by flow sorting technique. Cells with green fluorescence enhanced green fluorescent protein (EGFP) signal were isolated from 48hpf embryos. The expression of rap1b gene in the selected cells was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. Then the wild zebrafish multitemporal embryos were collected and the antisense m RNA probes of rap1b gene were prepared. The probes were observed in 3 groups of zebrafish embryos by in situ hybridization. Results the Q RT-PCR results showed that the experimental group 30 ~ 36. The expression of rap1b gene in 48hpf zebrafish embryos was significantly enhanced. Antisense m RNA probes of rap1b gene were prepared. The results of in situ hybridization showed that:. Rap1b gene was expressed in 3 groups of zebrafish embryos at 1848hpf. Conclusion there is a clear expression of rap1b gene in overexpression of hoxb4 transgenic zebrafish. A marked upward trend. It is suggested that rap1b gene and hoxb4 gene may be involved in the regulation of early hematopoietic development.
【作者單位】： 貴州醫(yī)科大學組織工程與干細胞實驗中心;貴州醫(yī)科大學兒科學教研室;貴州醫(yī)科大學免疫學教研室;貴州醫(yī)科大學實驗動物中心;
【基金】：國家自然科學基金面上項目(31360285)~~
【分類號】：R331
【正文快照】： with whole-mount in situ hybridization(WISH).Results The results of q RT-PCR showed that theexpression of rap1b gene was significantly enhanced on 30,36 and 48hpf in the experimental group(P0.05).Antisense m RNA probes of rap1b gene were successfully ac

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