本文關(guān)鍵詞： 日本囊對蝦 卵巢 組織蛋白酶B基因 原核表達(dá) 多克隆抗體　出處：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：采用原核表達(dá)的方法得到日本囊對蝦(Marsupenaeus japonicus)組織蛋白酶B基因的重組蛋白。以日本囊對蝦卵巢組織為試驗(yàn)材料,采用雙標(biāo)簽(GST和His)的方法,用帶有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位點(diǎn)以及6×His-tag的特異引物擴(kuò)增Cathepsin B的開放閱讀框,并連接至表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-2中。將重組表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌BL21中,在30℃條件下,用終濃度為1mmol/L的IPTG(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside)誘導(dǎo)5h得到最佳誘導(dǎo)量,His親和柱進(jìn)行純化,純化蛋白依次于8、6、4、2、1、0 mol/L尿素緩沖液中梯度透析,得到復(fù)性后可溶于水的重組蛋白,經(jīng)SDS-PAGE檢測,得到單一條帶,其分子質(zhì)量約為63ku。取凍干后的蛋白制備多克隆抗體,抗體效價(jià)達(dá)50 000,經(jīng)Western blot檢測,同樣可在63ku處得到該條帶,表明制備的組織蛋白酶B(CB)多克隆抗體具有特異性,該抗體可特異識別CB蛋白。
[Abstract]:The recombinant protein of cathepsin B gene of Marsupenaeus japonicus was obtained by prokaryotic expression. The ovarian tissue of Penaeus japonicus was used as experimental material. The method of double label GST and Hisl was used. The open reading frame of Cathepsin B was amplified with specific primers containing EcoR 鈪，

本文編號：1477720