本文關(guān)鍵詞： 子宮內(nèi)膜癌 早期生長(zhǎng)反應(yīng)基因-1 Egr-1 免疫組化 WesternBlotting　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:子宮內(nèi)膜癌(Endometrial Carcinoma,EC)是來(lái)源于子宮內(nèi)膜的一種上皮性癌,是女性常見(jiàn)生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì),子宮內(nèi)膜癌約占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的25%-30%,嚴(yán)重威脅著廣大女性的身心健康。子宮內(nèi)膜樣腺癌為最常見(jiàn)的病理類型,圍絕經(jīng)期婦女和絕經(jīng)后女性是其好發(fā)人群。目前,子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素參與的病理過(guò)程。隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)的發(fā)展,越來(lái)越多的病因?qū)W研究集中在多種關(guān)鍵因子或信號(hào)通路上,早期生長(zhǎng)反應(yīng)基因-1(Early growth response gene-1,Egr-1)作為一種新發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)基因受到廣泛關(guān)注。Egr-1基因?qū)儆诩纯淘缙诨蚣易?是一種具有三鋅指結(jié)構(gòu)的核轉(zhuǎn)錄因子,廣泛存在于從酵母菌到人的真核細(xì)胞基因庫(kù)中,在進(jìn)化過(guò)程中相當(dāng)保守,多種不同細(xì)胞外信號(hào)刺激均可誘導(dǎo)其瞬時(shí)表達(dá),激活后的Egr-1可與下游基因啟動(dòng)子區(qū)域的特異性位點(diǎn)結(jié)合,調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá),發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)。生理情況下,Egr-1基因參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化、凋亡以及組織創(chuàng)傷修復(fù)、炎性反應(yīng)等多種生命活動(dòng)。近年來(lái),隨著國(guó)內(nèi)外學(xué)者的深入研究Egr-1基因在腫瘤組織中所起的作用逐漸被發(fā)現(xiàn),多種研究結(jié)果已經(jīng)證實(shí)Egr-1基因在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中具有雙重作用。在多種腫瘤如胃癌、睪丸胚胎癌等中發(fā)現(xiàn)Egr-1基因表達(dá)量顯著升高;而在卵巢癌、結(jié)直腸癌、食管癌、肺癌、鼻咽癌、肝癌等腫瘤組織中表達(dá)明顯減少甚至缺失。其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起何種作用取決于其誘導(dǎo)何種蛋白表達(dá)以及通過(guò)何種信號(hào)通路起作用。但是,到目前為止Egr-1基因具體在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起何種作用尚未報(bào)道,Egr-1基因在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況亦不十分清楚。因此,本研究運(yùn)用免疫組化技術(shù)和Western Blotting技術(shù)檢測(cè)EGR-1蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)情況,探討Egr-1在子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用及意義。方法:1收集標(biāo)本:本研究選取2012.01至2016.08在石家莊市第六醫(yī)院婦科住院的新發(fā)子宮內(nèi)膜樣腺癌標(biāo)本35例為實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組:不典型增上子宮內(nèi)膜25例,正常子宮內(nèi)膜27例。所有標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)證實(shí),其中子宮內(nèi)膜樣腺癌標(biāo)本均為原發(fā)病例且術(shù)前未接受過(guò)其他方法治療,正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本取自異常子宮出血以及因卵巢良性病變切除子宮,但臨床病理證實(shí)無(wú)子宮內(nèi)膜病變的患者。2免疫組化法:取適量收集到的組織標(biāo)本浸泡于福爾馬林溶液中,石蠟包埋,制成石蠟切片,嚴(yán)格按照免疫組化試劑盒(SP法)的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn),以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照,以排除假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果,以免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的百分比作為結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn),對(duì)實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以?(28)(15)(13)(15)(20)為檢驗(yàn)水準(zhǔn),P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3蛋白印記(Western Blotting)法:取適量新鮮組織標(biāo)本,迅速放入-80℃冰箱中保存,待用時(shí)取出制成勻漿,提取組織總蛋白,根據(jù)BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度,嚴(yán)格按照Western Blotting技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn),以EGR-1蛋白條帶的灰度值與相應(yīng)組織中?-actin條帶灰度值的比值,即OD值作為統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù),結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以?(28)(15)(13)(15)(20)為檢驗(yàn)水準(zhǔn),P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1免疫組化(SP法)檢測(cè)Egr-1在三種組織標(biāo)本中的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,在子宮內(nèi)膜癌組織、子宮內(nèi)膜不典型增生組織以及正常子宮內(nèi)膜組織中,EGR-1蛋白陽(yáng)性顆粒主要分布于細(xì)胞核內(nèi),部分細(xì)胞質(zhì)中有少量表達(dá),其在正常子宮內(nèi)膜組織中呈較低水平表達(dá),在不典型增生組織中表達(dá)量顯著增多,在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)量明顯減少甚至缺失,三組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2 Western Blotting法檢測(cè)Egr-1蛋白在以上三種標(biāo)本中的表達(dá)。EGR-1蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織中的相對(duì)表達(dá)量為1.47±0.112,不典型增生子宮內(nèi)膜組織中為4.98±0.720,子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中為0.52±0.010。在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中表達(dá)量最低,三組間比較Egr-1的表達(dá)量存在顯著差異(P0.01)。結(jié)論:EGR-1蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織中呈較低水平表達(dá),在不典型增生子宮內(nèi)膜組織中表達(dá)量顯著增高,而在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)明顯減少甚至缺失。推測(cè)在組織惡變過(guò)程中,機(jī)體發(fā)動(dòng)多種機(jī)制對(duì)抗組織惡變,多種因子共同作用激活Egr-1,使其表達(dá)量顯著增高,隨著機(jī)體對(duì)抗作用減弱,Egr-1表達(dá)量隨之減少甚至缺失,組織進(jìn)一步惡變?yōu)榘gr-1基因可能具有抑制子宮內(nèi)膜發(fā)生癌變的作用,有可能成為子宮內(nèi)膜癌治療的新靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1463964