本文關(guān)鍵詞： INHα基因 siRNA 綿羊 顆粒細(xì)胞　出處：《畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年08期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：旨在研究RNA干擾INHα基因?qū)d羊顆粒細(xì)胞周期及凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響,明確抑制素對(duì)綿羊顆粒細(xì)胞的局部調(diào)節(jié)作用,為今后提高動(dòng)物的繁殖力奠定基礎(chǔ)。選用1.0~1.5歲的小尾寒羊,從卵泡(3~7mm)中分離培養(yǎng)顆粒細(xì)胞,將siINHα和siNC(陰性對(duì)照)轉(zhuǎn)染顆粒細(xì)胞,以未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞為空白對(duì)照(Control),利用脂質(zhì)體介導(dǎo)法進(jìn)行轉(zhuǎn)染,熒光定量RT-PCR檢測(cè)INHα基因的沉默效率、細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)基因的變化,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的分布變化。結(jié)果表明,siRNA轉(zhuǎn)染綿羊顆粒細(xì)胞48h后,INHα基因的沉默效率達(dá)85%以上。與陰性對(duì)照相比,細(xì)胞周期相關(guān)基因Cyclin D1和CyclinB1mRNA的表達(dá)水平分別降低了0.2倍和0.7倍(P0.05),而p21的mRNA表達(dá)水平升高了0.9倍(P0.05);細(xì)胞凋亡通路中的促凋亡因子Bax、p53和Caspase3的mRNA表達(dá)量分別升高了1.8倍、3.6倍和0.4倍(P0.05),而抗凋亡因子Bcl-2mRNA表達(dá)量不受影響,陰性對(duì)照與空白對(duì)照差異不顯著(P0.05)。與陰性對(duì)照相比,細(xì)胞周期的分布顯著改變,干擾組G1細(xì)胞比例顯著升高(P0.05),S期細(xì)胞比例顯著降低(P0.05),而陰性對(duì)照與空白對(duì)照間無(wú)顯著差異(P0.05)。綜上表明,INHα作為綿羊顆粒細(xì)胞中關(guān)鍵的調(diào)控因子,通過(guò)調(diào)控綿羊顆粒細(xì)胞的生長(zhǎng)和凋亡參與調(diào)控綿羊卵泡排卵的過(guò)程。
[Abstract]:The purpose of this study was to investigate the effect of RNA interference on the expression of apoptosis-related genes and cell cycle in sheep granulosa cells, and to clarify the local regulation of inhibin on sheep granulosa cells. In order to improve the fecundity of animals in the future, small tail Han sheep (1.0 ~ 1.5 years old) were used to isolate and culture granulosa cells from follicular follicles (3 ~ 7 mm). SiINH 偽 and siNC- (negative control) were transfected into granulosa cells, and the untransfected cells were used as blank control. The transfection was carried out by liposome mediated method. Fluorescence quantitative RT-PCR was used to detect the silencing efficiency, cell cycle and apoptosis-related genes of INH 偽 gene. Flow cytometry was used to detect the distribution of cell cycle. After transfection of siRNA into sheep granulosa cells for 48 h, the silencing efficiency of siRNA 偽 gene was more than 85%, which was higher than that of negative control group. The expression of cell cycle related gene Cyclin D1 and CyclinB1mRNA decreased 0.2-fold and 0.7-fold P0.05, respectively. The mRNA expression level of p21 was 0.9-fold higher than that of P0.05; The expression of apoptosis-promoting factor Baxon p53 and Caspase3 in apoptotic pathway increased by 1.8-fold, 3.6-fold and 0.4 times respectively (P0.05). However, the expression of anti-apoptotic factor Bcl-2mRNA was not affected, and the difference between negative control and blank control was not significant (P 0.05). Compared with negative control, the distribution of cell cycle was significantly changed. The proportion of G1 cells in the interference group was significantly higher than that in the control group, and the proportion of P0.05 cells in the S phase decreased significantly, but there was no significant difference between the negative control group and the blank control group. As a key regulatory factor in sheep granulosa cells, INH 偽 participates in the regulation of ovulation by regulating the growth and apoptosis of sheep granulosa cells.
【作者單位】： 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;
【基金】：國(guó)家現(xiàn)代肉羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目(CARS-39) 河北省研究生創(chuàng)新資助項(xiàng)目(1099009)
【分類號(hào)】：S826.2
【正文快照】： 卵泡發(fā)育受到卵巢內(nèi)生長(zhǎng)因子、垂體促性腺激素和類固醇激素協(xié)同作用,其過(guò)程主要表現(xiàn)為卵泡的生長(zhǎng)和閉鎖。在參與卵巢卵泡生長(zhǎng)和閉鎖的眾多因子中,抑制素起重要作用[1-3]。抑制素(Inhibin,INH)主要由卵巢顆粒細(xì)胞分泌,是α、β亞基通過(guò)二硫鍵構(gòu)成的糖蛋白質(zhì)激素,通過(guò)反饋抑制垂

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本文編號(hào)：1461339