發(fā)布時(shí)間：2018-01-23 10:51

  本文關(guān)鍵詞： 快速高效 克隆體系 ccdB基因 SmaⅠ酶切位點(diǎn)　出處：《基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)》2017年07期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：PCR片段快速準(zhǔn)確的構(gòu)建到克隆載體是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵技術(shù)之一�？焖俑咝У捅尘翱寺◇w系的建立可以顯著提高PCR產(chǎn)物的克隆效率及大大縮短克隆時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)出一種在常規(guī)條件下進(jìn)行快速高效PCR連接的克隆體系。本研究將含有ccd B致死基因的gateway cassette片段,插入p UC18載體,成功構(gòu)建p UC18-Ccd B致死載體,在此基礎(chǔ)上結(jié)合ccd B致死基因內(nèi)部的SmaⅠ酶切位點(diǎn),開(kāi)發(fā)出將PCR產(chǎn)物、SmaⅠ限制性?xún)?nèi)切酶、T4連接酶及p UC18-Ccd B致死載體一起加入離心管后共孵育10 min,即可轉(zhuǎn)化大腸桿菌。對(duì)插入片段的重組質(zhì)粒進(jìn)行了酶切,PCR和測(cè)序驗(yàn)證,證實(shí)了該克隆體系高效可行,具有極高的陽(yáng)性克隆率。該體系的建立具有高效低背景的特點(diǎn),并且極大的減少了克隆步驟,省去了膠回收及雙酶切過(guò)程,縮短了克隆時(shí)間,同時(shí)繼承了p UC18載體的優(yōu)點(diǎn),具有很強(qiáng)的應(yīng)用性及推廣性。
[Abstract]:The rapid and accurate construction of PCR fragment to clone vector is one of the key techniques in molecular biology experiment. The establishment of rapid and efficient low background cloning system can significantly improve the cloning efficiency of PCR products and shorten the cloning. Our laboratory has developed a clone system for fast and efficient PCR connection under conventional conditions. This study will contain ccd. Gateway cassette fragment of B lethal gene. Inserted into p UC18 vector, we successfully constructed p UC18-Ccd B lethal vector. On this basis, we combined the Sma 鈪，

本文編號(hào)：1457368