本文關鍵詞： miR-182 奶山羊 子宮內(nèi)膜上皮細胞 HOXA10　出處：《西北農(nóng)林科技大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：MiR-182對動物的生長和發(fā)育具有調(diào)控作用,而HOXA10在胚胎植入過程有著重要的調(diào)節(jié)功能,生物信息學分析表明,miR-182可能靶向調(diào)控HOXA10。因此研究miR-182對奶山羊子宮內(nèi)膜上皮細胞(EEC)中HOXA10基因的調(diào)控作用,有助于進一步闡明胚胎著床的分子機理。本研究以關中奶山羊為研究對象,首先檢測miR-182和HOXA10在容受期和非容受期子宮內(nèi)膜的表達,然后分析miR-182對HOXA10的靶向調(diào)控作用,最后檢測miR-182對EEC的調(diào)控作用,主要研究結果如下:1.利用RT-qPCR技術分別檢測miR-182和HOXA10在容受期和非容受期子宮內(nèi)膜的表達。結果表明,mi R-182和HOXA10在容受期子宮內(nèi)膜的表達均極顯著高于(P0.01)非容受期子宮內(nèi)膜的表達。2.利用雙熒光素酶報告載體、RT-qPCR以及Western blot等檢測技術,檢測mi R-182對HOXA10的調(diào)控作用。結果表明,將miRNA模擬物與HOXA10雙熒光素酶報告載體共轉(zhuǎn)后,發(fā)現(xiàn)miR-182 mimic組熒光素酶活性極顯著低于NC對照組(P0.01);而突變型各組熒光素酶活性均差異不顯著,表明miR-182可與HOXA10基因3′UTR區(qū)的靶位點結合,驗證HOXA10為miR-182的靶基因。RT-qPCR以及Western blot結果顯示,miR-182在mRNA水平和蛋白水平均抑制了HOXA10的表達。3.利用Western blot及細胞周期和凋亡檢測技術檢測miR-182對EEC的調(diào)控作用。將miR-182轉(zhuǎn)入EEC中,發(fā)現(xiàn)miR-182并不調(diào)控奶山羊EEC的周期,但促進了奶山羊EEC的凋亡。進一步研究發(fā)現(xiàn)miR-182通過下調(diào)BCL-2蛋白的表達,上調(diào)Caspase-3和Fas蛋白的表達促進EEC的凋亡。mi R-182靶向調(diào)控HOXA10基因,在mRNA水平和蛋白水平下調(diào)了HOXA10的表達;miR-182促進奶山羊EEC的凋亡。
[Abstract]:MiR-182 regulates the growth and development of animals, while HOXA10 plays an important role in the process of embryo implantation, bioinformatics analysis shows that. MiR-182 may target HOXA10.Therefore, the regulation of miR-182 on HOXA10 gene in dairy goat endometrial epithelial cells was studied. In order to further clarify the molecular mechanism of embryo implantation, the expression of miR-182 and HOXA10 in the endometrium of Guanzhong dairy goat was detected at first. Then, the target regulation of HOXA10 by miR-182 was analyzed. Finally, the regulatory effect of miR-182 on EEC was detected. The main results are as follows: 1. The expression of miR-182 and HOXA10 in the endometrium of the receptive phase and the non-receptive phase were detected by RT-qPCR technique. The expression of miR-182 and HOXA10 in the endometrium of the receptive phase was significantly higher than that in the non-receptive endometrium. 2. Double luciferase was used to report the expression of miR-182 and HOXA10 in the endometrium. RT-qPCR and Western blot were used to detect the regulatory effect of miR-182 on HOXA10. The results showed that the luciferase activity of miR-182 mimic group was significantly lower than that of NC control group (P 0.01). However, the luciferase activity of mutant groups was not significantly different, indicating that miR-182 could bind to the target site of HOXA10 gene 3UTR region. The results of RT-PCR and Western blot showed that HOXA10 was the target gene of miR-182. MiR-182 inhibited the expression of HOXA10 at both mRNA and protein levels. Using Western. Blot, cell cycle and apoptosis detection techniques were used to detect the regulation of miR-182 on EEC. MiR-182 was transferred into EEC. It was found that miR-182 did not regulate the cycle of EEC in dairy goats, but promoted the apoptosis of EEC in dairy goats. Further studies showed that miR-182 down-regulated the expression of BCL-2 protein. Upregulating the expression of Caspase-3 and Fas protein promoted the apoptosis of EEC. Mi R-182 targeted HOXA10 gene. The expression of HOXA10 was down-regulated at the level of mRNA and protein. MiR-182 promotes the apoptosis of EEC in dairy goats.
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S827

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