本文關(guān)鍵詞：甘蔗條紋花葉病毒HC-Pro、P3N-PIPO、CP和VPg基因酵母雙雜交誘餌表達載體的構(gòu)建及自激活檢測　出處：《華北農(nóng)學報》2016年01期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：為探索甘蔗條紋花葉病毒與甘蔗的互作機制,利用酵母雙雜交技術(shù)篩選與SCSMV互作的甘蔗因子基因,利用PCR技術(shù)克隆了SCSMV的HC-Pro、P3N-PIPO、CP和VPg的編碼區(qū),構(gòu)建到酵母雙雜交誘餌載體p GBKT7上,獲得了p GBKT7-HC-Pro、p GBKT7-P3N-PIPO、p GBKT7-CP和p GBKT7-VPg 4個誘餌載體。結(jié)果顯示,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母Y2HGold酵母菌株后,酵母菌株在SD/-Trp平板上生長良好,表明重組誘餌質(zhì)粒表達產(chǎn)物對酵母細胞無毒性;在SD/-Trp/X-α-gal平板上長出白色菌落未變藍,在SD/-Leu、SD/-Trp/-Ade、SD/-Trp/-His和SD/-Trp/X-α-gal/Ab A平板上不能生長,表明重組誘餌質(zhì)粒表達產(chǎn)物對MEL1、ADE2、HIS3和AUR1-C報告基因無自激活作用。構(gòu)建的誘餌表達載體可以作為誘餌用于文庫篩選,為探索SCSMV侵染機制和發(fā)病機理奠定了基礎。
[Abstract]:In order to explore the interaction mechanism between sugarcane stripe mosaic virus and sugarcane, the gene of sugarcane factor interacting with SCSMV was screened by yeast two-hybrid technique, and the HC-Pro of SCSMV was cloned by PCR technique. The coding region of CP and VPg was constructed into yeast two-hybrid bait vector p GBKT7 and p GBKT7-HC-Pro was obtained. Four decoy vectors, p GBKT7-P3N-PIPOP GBKT7-CP and p GBKT7-VPg, were obtained. After the recombinant plasmid was transformed into yeast Y2HGold yeast strain, the yeast strain grew well on the SD/-Trp plate, indicating that the recombinant bait plasmid expression product was not toxic to yeast cells. On the SD-Trp / X- 偽 -gal plate, the white colonies don't turn blue, and at the SD-Leuum SD-Trp / Ade. SD/-Trp/-His and SD-Trp / X- 偽 -gal-a-Ab A could not grow on the plate, indicating that the recombinant bait plasmid expressed product of MEL1 and ADE2. HIS3 and AUR1-C reporter genes have no self-activation. The constructed decoy expression vector can be used as bait for library screening, which lays a foundation for exploring the mechanism of SCSMV infection and pathogenesis.
【作者單位】： 農(nóng)業(yè)部福建甘蔗生物學與遺傳育種重點實驗室福建農(nóng)林大學;
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃“863計劃”項目(2013AA102604) 國家自然科學基金項目(31171605;31371688)
【分類號】：S435.661
【正文快照】： 甘蔗(Saccharum officinarum L.)是我國和全世界主要的糖料作物和能源作物。甘蔗花葉病(Sug-arcane mosaic disease,SMD)是嚴重危害甘蔗生產(chǎn)的病毒性病害之一,嚴重影響甘蔗的產(chǎn)量和品質(zhì)。甘蔗感病后,病株葉片出現(xiàn)黃綠相間的斑紋、分蘗減少、生長緩慢、節(jié)間變短、品質(zhì)下降,產(chǎn)量

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本文編號：1405115