本文關(guān)鍵詞：中華蜜蜂乙酰膽堿酯酶基因的克隆及其在畢赤酵母中的表達(dá)鑒定　出處：《食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)》2016年12期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：有機(jī)磷污染是食品安全的重大隱患,乙酰膽堿酯酶(Acetyl cholinesterase,ACh E)可用于有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測。中華蜜蜂是我國獨(dú)有的蜜蜂當(dāng)家品種,蜜蜂對農(nóng)藥的敏感性很高,中華蜜蜂來源的乙酰膽堿酯酶基因尚未被克隆并應(yīng)用于食品安全監(jiān)測。以中華蜜蜂頭部組織總RNA為模板,經(jīng)RACE方法獲得了ACh E基因c DNA全序列,全長約1.8 kb。構(gòu)建重組表達(dá)載體p PIC3.5K-ACh E,將目的基因表達(dá)盒整合入畢赤酵母GS115的基因組中獲得重組菌株,0.5%甲醇誘導(dǎo)重組菌株表達(dá)ACh E蛋白,經(jīng)SDS-PAGE、酶活性分析表明,中華蜜蜂ACh E基因首次克隆成功并首次在畢赤酵母中獲得成功表達(dá),篩選出一株酶活性較高的菌株,純化的重組乙酰膽堿酯酶其活性為10 568 U/mg,可以用于有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測。
[Abstract]:Organophosphorus contamination is an important hidden danger of food safety. Acetylcholinesterase (ache) is Acetyl cholinesterase. ACh E) can be used for the detection of organophosphorus pesticide residues. Honeybee is a unique honeybee species in China, which is highly sensitive to pesticides. The acetylcholinesterase gene from Chinese honeybee has not been cloned and applied to food safety monitoring. The total RNA of the head tissue of honeybee bee was used as a template. The whole sequence of c DNA of ACh E gene was obtained by RACE method. The total length of c DNA was about 1.8 kb.Recombinant expression vector p PIC3.5K-ACh E was constructed. The target gene expression cassette was integrated into the genome of Pichia pastoris GS115. The recombinant strain was induced by 0.5% methanol to express ACh E protein by SDS-PAGE. Enzyme activity analysis showed that ACh E gene was cloned successfully and successfully expressed in Pichia pastoris for the first time. A strain with high enzyme activity was screened out. The purified recombinant acetylcholinesterase has an activity of 10 568 U / mg and can be used for the detection of organophosphorus pesticide residues.
【作者單位】： 鄭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;糧食發(fā)酵工藝與技術(shù)國家工程實(shí)驗(yàn)室江南大學(xué);河南天茂生物有限公司;
【基金】：中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(JUSRP51401A)
【分類號】：Q78
【正文快照】： 近年來,隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,人們生活水平逐漸ACh E的文獻(xiàn)與專利的報(bào)道。當(dāng)前雖已開展了多種提高,越來越多的消費(fèi)者對食品的安全、營養(yǎng)等方生物來源的乙酰膽堿酯酶的研究[10-13],但其在農(nóng)藥面的要求的不斷提高。重視食品安全,已經(jīng)成為衡殘留檢測方面的應(yīng)用并不是最優(yōu)的,有必要研究

【參考文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：1389924