發(fā)布時間：2017-12-27 00:33

  本文關(guān)鍵詞：家蠶N-乙�；D(zhuǎn)移酶基因BmNAT的克隆與表達(dá)分析　出處：《蠶業(yè)科學(xué)》2016年02期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：N-乙�；D(zhuǎn)移酶(N-acetyltransferase,NAT)是昆蟲體內(nèi)一種催化乙�；鶊F(tuán)在乙酰輔酶A和胺之間轉(zhuǎn)移的酶,主要與色素沉積、生理節(jié)律等有關(guān)。對已公布的家蠶(Bombyx mori)N-乙�；D(zhuǎn)移酶基因Bm NAT(Gen Bank登錄號:NP_001040401.1)進(jìn)行生物信息學(xué)分析:該基因序列全長763 bp,ORF為564 bp,編碼187個氨基酸殘基,分子質(zhì)量21.4 k D;多序列比對表明Bm NAT與臍橙螟(Amyelois transitella)同源蛋白質(zhì)的序列相似性最高。通過原核表達(dá)的方法制備了融合Bm NAT蛋白,經(jīng)蛋白質(zhì)純化并免疫新西蘭兔獲得多克隆抗體。亞細(xì)胞定位顯示Bm NAT主要存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中。利用Western blotting檢測Bm NAT在家蠶不同發(fā)育時期和5齡幼蟲各組織器官的表達(dá)譜,結(jié)果表明Bm NAT在蛾、卵期以及5齡幼蟲的頭部表達(dá)量較高,與Bm NAT的qRT-PCR檢測結(jié)果基本一致,初步推斷Bm NAT可能在家蠶的這些組織或發(fā)育時期發(fā)揮一定的生物學(xué)功能。流式細(xì)胞實驗顯示Bm NAT對細(xì)胞周期可能存在一定的影響。
[Abstract]:N- N-acetyltransferase (NAT) is an enzyme that catalyzes the transfer of acetyl groups between acetyl coenzyme A and amine in insects, which is mainly related to pigment deposition, physiological rhythm and so on. Published on the silkworm (Bombyx mori) N- acetyltransferase gene (Bm NAT Gen Bank accession number: NP_001040401.1) by bioinformatics analysis: the gene sequence was 763 BP, ORF 564 BP, encoding 187 amino acid residues, the molecular weight of 21.4 K D; multiple sequence alignment showed that Bm NAT and navel orange moth (Amyelois transitella) the highest similarity of homologous protein sequences. The fusion Bm NAT protein was prepared by prokaryotic expression, and the polyclonal antibody was obtained by protein purification and immunization with New Zealand rabbits. Subcellular localization showed that Bm NAT was mainly found in cytoplasm and nucleus. Using Western blotting to detect Bm NAT expression in different developmental stages of silkworm and 5 instar larva tissues and organs of the spectrum, the results show that the Bm NAT in the moth, egg stage and 5 instar larvae of relatively high expression in the head, consistent with the Bm NAT qRT-PCR test results, it is concluded that Bm NAT may play a certain biological function in silkworm these tissues or developmental stages. Flow cytometry showed that Bm NAT might have a certain effect on the cell cycle.
【作者單位】： 浙江理工大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;浙江省家蠶生物反應(yīng)器和生物醫(yī)藥重點實驗室;
【基金】：國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃“973”項目(No.2012CB1146-00) 浙江省自然科學(xué)基金項目(No.LY16C170002) 國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃“863”項目(No.2011AA100603)
【分類號】：S881.2;Q78
【正文快照】： 鱗翅目昆蟲的體色形成模式與生理節(jié)律對其生存和繁衍具有重要意義。研究家蠶體色形成及生理節(jié)律的分子調(diào)控機(jī)制不僅有助于理解鱗翅目昆蟲色素及形態(tài)發(fā)育的代謝和調(diào)控網(wǎng)絡(luò),還能夠為家蠶功能基因的利用(如家蠶育種或鱗翅目害蟲防治)提供新思路[1]。N-乙�；D(zhuǎn)移酶(N-acetyltrans

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本文編號：1339542