本文關(guān)鍵詞：長(zhǎng)江江豚TRAIL基因的克隆、體外表達(dá)及生物學(xué)功能分析

  更多相關(guān)文章： TRAIL 江豚 細(xì)胞凋亡 Jurkat細(xì)胞 HeLa細(xì)胞

【摘要】：構(gòu)建可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)基因的表達(dá)體系,研究其蛋白表達(dá)產(chǎn)物對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的影響,為以后江豚免疫系統(tǒng)的研究奠定基礎(chǔ)。通過(guò)RT-PCR技術(shù)從江豚Neophocaena phoconoides血液總RNA中反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增出腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(簡(jiǎn)稱fTRAIL)的全長(zhǎng)cDNA序列,并將fTRAIL的胞外可溶性(簡(jiǎn)稱fsTRAIL)片段連接入表達(dá)載體pET43.1a中,在大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá)并純化,Western blotting對(duì)產(chǎn)物Nus-His-fsTRAIL蛋白進(jìn)行鑒定。體外用MTT法、臺(tái)盼藍(lán)拒染法及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Nus-His-fs TRAIL蛋白對(duì)Jurkat細(xì)胞和HeLa細(xì)胞的影響。成功構(gòu)建了fTRAIL胞外可溶性片段(簡(jiǎn)稱fsTRAIL)與pET43.1a組成的表達(dá)載體,并獲得Nus-His-fsTRAIL蛋白。體外實(shí)驗(yàn)表明,Nus-His-fsTRAIL蛋白能夠以劑量依賴的方式抑制Jurkat和HeLa細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其凋亡。Nus-His-fsTRAIL表達(dá)產(chǎn)物具有對(duì)Jurkat和HeLa細(xì)胞體外抗腫瘤活性的作用。
【作者單位】： 南京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院江蘇省分子醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;南京醫(yī)科大學(xué)康達(dá)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.31370401)資助~~
【分類號(hào)】：Q78
【正文快照】： Received:October 10,2015;Accepted:March 14,2016Supported by:National Natural Science Foundation of China(No.31370401).Corresponding author:Wenhua Ren.Tel/Fax:86-25-85891163;E-mail:spidervenom@163.com裴麗麗,章緯菁,盧佳,等.長(zhǎng)江江豚TRAIL基因的克隆、體外表達(dá)

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本文編號(hào)：1305750