本文關(guān)鍵詞：杜仲EuCHIT1基因表達(dá)載體構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 杜仲 幾丁質(zhì)酶基因(EuCHIT) 原核表達(dá) 可溶性蛋白

【摘要】：構(gòu)建了T7啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)杜仲幾丁質(zhì)酶基因EuCHIT1的原核表達(dá)載體pET-EuCHIT1和pMCSG-EuCHIT1,其表達(dá)產(chǎn)物分別含6個(gè)組氨酸(6His)標(biāo)簽和6個(gè)組氨酸連接的麥芽糖結(jié)合蛋白(his6-tag maltose-binding protein,MBP)標(biāo)簽,分別將重組載體遺傳轉(zhuǎn)化大腸桿菌細(xì)胞BL21(DE3),在37℃、150 rpm條件下培養(yǎng)至菌液OD值為0.4~0.8后,轉(zhuǎn)到16℃、150 rpm條件下以1 m MIPTG誘導(dǎo)培養(yǎng)12 h,表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE分析,p ET-EuCHIT1/BL21(DE3)表達(dá)以包涵體形式存在36.03 kD融合蛋白,pMCSG-EuCHIT1/BL21(DE3)成功表達(dá)可溶形式存在的77.21 kD融合蛋白。故可以使用pMCSG-EuCHIT1/BL21(DE3)獲得可溶的融合蛋白,為之后的EuCHIT1的多克隆抗體的制備和及功能研究奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 貴州大學(xué)農(nóng)業(yè)生物工程研究院/生命科學(xué)學(xué)院山地植物資源保護(hù)與種質(zhì)創(chuàng)新省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;綠色農(nóng)藥與農(nóng)業(yè)生物工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地;貴州省山地生態(tài)與農(nóng)業(yè)生物工程2011協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：國家863計(jì)劃項(xiàng)目(2013AA102605-05) 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31360272) 國家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育科技重大專項(xiàng)(2016ZX08010003-009)
【分類號】：Q943.2
【正文快照】： SDS-PAGE.The expression of p ET-Eu CHIT1/BL21(DE3)contained 36.03 k D fusion protein,and p MCSG-Eu CH-IT1/BL21(DE3)DE3)successfully expressed the soluble 77.21 k D fusion protein.It is concluded that the chtinase gene(Eu CHIT1)could be expressed in p MCS

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：1304212